$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. استخراج العصب الوركي
- خذ الفئران التي تم حقن أعصابها الوركي مسبقا بالخلايا السرطانية وقتلها رحيما بثاني أكسيد الكربون2. ضع الماوس على جانبه البطني وقم بتثبيت الأطراف البعيدة باستخدام المسامير.
- قم بإزالة الجلد الموجود على الجانب الظهري من الطرف والجذع المحقونين.
- باستخدام تشريح حاد ، قم بتعريض العصب الوركي في عمق العضلات.
- يدور العصب بين الحرقفة والعجز. للوصول إلى العصب في منطقة الحبل الشوكي ، افصل بين العظمتين. أولا ، أدخل مقصا مغلقا في المنطقة الضيقة حيث يوجد العصب الوركي ، ثم افتح المقص أثناء الإمساك بالماوس. كن حساسا وحافظ على سلامة العصب الوركي أثناء التشريح.
- قم بتشريح العصب الوركي بعناية بعيدا إلى نهاية عظم الفخذ وبالقرب من الحبل الشوكي.
ملاحظه: الأعصاب التي تم غزوها هشة للغاية وعرضة للكسر تحت التوتر أو التعامل بقوة.
- احصد العصب عن طريق قطع نهايته البعيدة أولا. ارفع العصب بعناية مع تحريره من الأنسجة المجاورة. قطع العصب في الطرف القريب ، في أقرب وقت ممكن من خروجه من العمود الفقري.
- سجل بعد ذلك الطول الإجمالي للغزو باستخدام الفرجار الورني. هذا التقدير العياني إرشادي فقط.
< p class = "jove_title" >
2. معالجة الأعصاب وتقديرها الكمي
- تضمين العصب المقطوع في مركب OCT. تأكد من وضع الأعصاب طوليا ومسطحا في قاع القالب قدر الإمكان.
- حدد على الكاسيت الجانب القريب والبعيد من العصب عن طريق وضع علامة على الحرف P (القريب) و D (بعيد
).
- ضع الأعصاب المدمجة فوق الثلج الجاف ، إذا لم يتم تقسيمها على الفور. يمكن حفظ العينة عند -80 درجة مئوية لعدة أسابيع.
- عينات القسم باستخدام ميكروتوم Cryostat بسمك 5 ميكرومتر ووضع الأقسام على شرائح زجاجية. إذا أمكن ، قم بتركيب قسمين عصبيين لكل شريحة. يشير إلى الجانب القريب من العصب.
- بقع الشرائح باستخدام تلطيخ H & E.
- امسح الأقسام العصبية الملطخة رقميا باستخدام ماسح ضوئي للشرائح يوفر بيانات رقمية عالية الدقة.
- باستخدام برنامج التصوير ، حدد طول الغزو بالنقر فوق زر قياس المسافة أو منطقة الغزو أو المعلمات الأخرى المطلوبة. للحصول على تقدير جيد لطول الغزو ، استخدم أقساما متعددة (2 إلى 4) من نفس العصب.