$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< ص الفئة = "jove_title" >
1. تحضير الفئران لحقن الخلايا السرطانية
- تخدير الفأر عن طريق الحقن داخل الصفاق (IP) من كوكتيل الكيتامين/زيلازين (كيتامين 100 ملغ/كغ، زيلازين 10 ملغم/كغ).
- تأكد من التخدير الكامل عن طريق الضغط على أقدام ولاحظ عدم الاستجابة.
- ضع الماوس على طبق زجاجي (يستخدم لصب المواد الهلامية البروتينية) وثبته بأربطة مطاطية.
- إذا لزم الأمر ، قم بإزالة شعر الرقبة عن طريق الحلاقة أو وضع كمية صغيرة من منتج إزالة الشعر ومسح الشعر بمنشفة ورقية.
ملاحظه: إذا كنت تستخدم الفئران العارية ، فتخط هذه الخطوة لأنها لا تحتوي على شعر في الجسم.
- نظف بشرة الرقبة عن طريق استخدام بوفيدون اليود و 70٪ كحول.
- ضع الماوس على مسرح مجهر التشريح
- قم بعمل شق في الجلد بطول ~ 1 سم بمشرط جراحي.
- قم بتشريح العضلات بصراحة باستخدام ملقط مسنن لفضح الشريان السباتي تحتها.
- افصل الشريان السباتي عن العصب المبهم المجاور باستخدام ملقط جراحي.
- باستخدام ملقط جراحي ، افصل بعض القطن عن كرة قطنية ، رطب ، وصممه في كرة قطنية أصغر. ضع هذه الكرة القطنية المرطبة بالمخزن المؤقت تحت الشريان السباتي في الموقع المقصود للحقن.
- ضع خياطة بعيدة وقريبة من كرة القطن وقم بعمل عقدة فضفاضة. شد العقدة القريبة لمنع تدفق الدم إلى موقع الحقن.
- انتقل إلى حقن الخلايا السرطانية إذا ظهر الشريان السباتي الموجود على كرة القطن مضغوطا بالكامل بدم أحمر طازج.
فئة
2. حقن الخلايا السرطانية في الشريان السباتي
- دوامة وسحب 100 ميكرولتر من الخلايا السرطانية في المحقنة.
- تحت مجهر التشريح ، أدخل إبرة 31G ببطء (مع شطبة لأعلى) في تجويف الشريان السباتي الموجود أعلى كرة القطن.
- حقن الخلايا ببطء من المحقنة في الشريان السباتي. يمكن ملاحظة الحقن الناجح تحت المجهر من خلال تغير لون الأوعية الدموية والعضلات القريبة عندما يتم دفع الخلايا السرطانية المخزنة في الدورة الدموية.
- عند اكتمال حقن الحجم بالكامل ، ارفع الشريان السباتي البعيد برفق لمنع القلس.
- شد العقدة البعيدة بسرعة لإكمال عملية الحقن.
- بعد الانتهاء من الحقن ، شد الأربطة وقص خياطة الحرير الزائدة بمقص دقيق تحت مجهر التشريح. حرك العضلة المنفصلة للخلف لتغطية موقع الجرح. أغلق الجلد باثنين من الدبابيس.
فئة
3. التعافي الجراحي
- انقل الذي تم تشغيله إلى وسادة تدفئة للتعافي. قد يستغرق الأمر من 30 إلى 60 دقيقة حتى تستعيد وعيها. في غضون ذلك، يتم تطبيق البوبرينورفين (0.05 ملغ/كغ) عن طريق الحقن تحت الجلد كمسكن بعد الجراحة.
ملاحظه: يجب توفير التسكين وفقا للبروتوكول المحلي المعتمد من IACUC.
- بمجرد أن تستيقظ وتستأنف سلوكها الطبيعي ، أعد الفئران إلى موقع سكنها. تزويد الفئران بالطعام الهلامي لعدة أيام بعد الجراحة. احتفظ بسجل جراحي واحتفظ به في الغرفة.
< p class = "jove_title" >
4. التصوير غير الجراحي في الجسم الحي
- بالنسبة للخلايا المصنفة بتركيبات مراسل لوسيفيراز ، قم بقياس كفاءة حقن الخلايا السرطانية باستخدام نظام التصوير في الجسم الحي. < / >
ملاحظه: لا يتم إجراء التصوير في يوم الحقن لتجنب الإجهاد المفرط لحيوانات البحث.