التثقيب الكهربائي لخلية واحدة في مزارع شرائح الدماغ العضوية: تقنية في المختبر لتوصيل البلازميدات داخل الخلايا العصبية المستهدفة في شرائح الحصين في الدماغ

الملخص

المصدر: Keener ، D. G. et al. التثقيب الكهربائي أحادي الخلية عبر ثقافة شرائح النمط العضوي المختلفة للخلايا العصبية المثبطة للحصين والحصين الخاصة بالفئة. J. Vis. Exp. (2020)

يوضح هذا الفيديو بروتوكول التثقيب الكهربائي أحادي الخلية للجينات في كل من الخلايا العصبية المثيرة والمثبطة عبر مجموعة من مزارع شرائح الحصين في المختبر. هذه التقنية مفيدة لفحص الوظائف الجزيئية والفسيولوجية المحددة للخلايا العصبية ، بما في ذلك آليات استقلالية الخلية وتفاعلات البروتين عبر المشبكي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. إعداد ثقافة الشريحة

1. قم بإعداد مزارع شرائح الحصين العضوية للفأر باستخدام الفئران بعد الولادة التي تتراوح أعمارها بين 6 و 7 أيام من كلا الجنسين.
   1. تحضير وسائط التشريح لزراعة الشرائح العضوية المكونة من (بالمللي مولار): 238 سكروز ، 2.5 كيلوكلوريد ، 1 كلوريد_{كنسيوم 2} ، 4 ملجمكلوريد₂ ، 26 هيدروكسيد الصوديوم₃ ، 1 هيدروهيدروكسيد_{الصوديوم 2}PO₄ ، و 11 جلوكوز في الماء منزوع الأيونات ، ثم الغاز بنسبة 5٪ ثاني أكسيد الكر....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: صورتان تمثيليتان للماصة الزجاجية. (أ) عرض ماصات أقل مقاومة (6.5 MΩ)، مستخدمة في هذا البروتوكول، و (ب) ماصات ذات مقاومة أعلى (10.4 MΩ) نموذجية لبروتوكولات التثقيب الكهربائي.

< p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 2: تم تزويد مزار.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات تحضير البلازميد طقم تنقية البلازميد كياجين هاتف 12362 تحضير ثقافة الشرائح العضوية 6 أطباق جيدة غرينر بيو ون 657160 دومون # 5/45 ملقط FST #5/45 ملقط تشريح بزاوية لتحضير ثقافة الشرائح العضوي وحدة تصفية القارورة ميليبور SCHVU02RE ترشيح وتخزين وسائط الاستزراع حاضنه الموثق دينار بحريني C150-UL ماكلوين مروحية مناديل تيد بيلا ، إنك. 10180 مفرمة مناديل لإعداد ثقافة الشرائح العضوية إدراج ثقافة الخلايا Millicell، 30 مم ميليبور PIHP03050 إدراج ثقافة الشرائح العضوية مقياس التناضح أنظمة الدقة OSMETTE II ملاعق مطلية ب PTFE كول بارمر سك - 06369-11 مقص FST 14958-09 مجهر ستيريو أوليمبوس ش.ز61 نظام ترشيح الفراغ المعقم ميليبور SCGPT01RE ترشيح وتخزين aCSF تحضير القطب الكهربائي نظارات شعرية وارنر إنسترومنتس 640796 مجتذب Micropipetter أداة سوتر ف -1000 ساحبه فرن الموثق دينار بحريني (E2) خيوط مجتذب أداة سوتر FB330B ساحبه أطباق فالكون بتري 3.5 ملم بي دي فالكون 353001 منضدة TMC 63-7512 [إ] كاميرا CCD تصوير Q ريتيجا -2000 تيار مستمر كاميرا نظام التثقيب الكهربائي الأجهزة الجزيئية Axoporator 800A المثقاب الكهربائي نظام إضاءة التألق قبل التجويف 200 مناور أداة سوتر MPC-385 مناور برنامج Metamorph الأجهزة الجزيئية الحصول على الصور مضخة تمعجية رينين ديناماكس ، RP-2 مضخة التروية طاولة التحول لويجز ونيومان 240 س س سماعة مجهول مكبرات صوت متصلة بجهاز التثقيب الكهربائي مجهر ستيريو أوليمبوس 30 ش.س حاضنة سطح الطاولة الترمو: العلمية ميدي 40 مجهر عمودي أوليمبوس BX61WI