Method Article

عزل الخلايا العصبية في الحبل الشوكي: إجراء تدرج الكثافة لعزل الخلايا العصبية في الحبل الشوكي لحديثي الولادة للدراسات في المختبر

December 22nd, 2025

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

[تدرج FIGURE1 هنا]

الشكل 1: تشريح العمود الفقري وإطلاق الحبل الشوكي من فأر حديث الولادة يبلغ من العمر 3 أيام. يشير السهم الموجود في (أ) إلى الطرف الذيلي للعمود الفقري ، حيث يتم إدخال إبرة لتحرير الحبل الشوكي. يظهر الحبل الشوكي المطلق (ب) مغمورا في PBS.

[تدرج FIGURE2 هنا]

الشكل 2: تدرج الكثافة ، مع إضافة الخلايا بعد الطرد المركزي. يتم تحديد الطبقات وتصورها بشكل أفضل في تصوير الرسوم المتحركة. الطبقة الأكثر سطحية (0) هي بشكل عام حطام من أنسجة الحبل الشوكي. الطبقة 1 غنية بالخلايا قليلة التغصن والخلايا النجمية. تحتوي الطبقتان 2 و 3 على غالبية الخلايا العصبية. بينما تحتوي الطبقة 3 على خلايا عصبية ذات أعلى نقاء ، توجد بعض الخلايا الداعمة (مثل الخلايا النجمية والخلايا قليلة التغصن) في الطبقة 2. تحتوي الحبيبات الموجودة في الأسفل بشكل أساسي على خلايا دبقية صغيرة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Eldeiry، M. et al. عزل الخلايا العصبية في الحبل الشوكي وثقافته من الفئران حديثي الولادة.

في هذا الفيديو ، نصف بروتوكولا خطوة بخطوة لعزل الخلايا العصبية في الحبل الشوكي من فأر حديثي الولادة للدراسات في المختبر.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< ص الفئة = "jove_title" >1. حصاد الحبال الشوكية

ملاحظة: يجب تعقيم جميع الأدوات (135 درجة مئوية و 30 رطل لكل بوصة مربعة لمدة 4 × 7 دقائق) للعقم.

    قتل جراب
  1. الفئران C57BL / 6 البالغة من العمر 1-3 أيام في غرفة مع الأيزوفلوران. انتظر 30 ثانية بعد توقف الحركة واضغط على الساق لتأكيد عدم الاستجابة.
  2. افصل الرأس عن الجسم باستخدام المقص ، مع وضع الجرو في وضع الانبطاح.
  3. ثبت الساقين الخلفيتين أو الذيل والذراعين على طاولة الإجراءات، بحيث يكون الجانب الظهري مواجه....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: تشريح العمود الفقري وإطلاق الحبل الشوكي من فأر حديث الولادة يبلغ من العمر 3 أيام. يشير السهم الموجود في (أ) إلى الطرف الذيلي للعمود الفقري ، حيث يتم إدخال إبرة لتحرير الحبل الشوكي. يظهر الحبل الشوكي المطلق (ب) مغمورا في PBS.

< p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments السبات A متوسط - 500 مل ثيرمو فيشر A1247501 https://www.thermofisher.com/ طلب / كتالوج / منتج / A1247501 السبات أ ناقص الكالسيوم - 500 مل العقل HA-Ca http://www.brainbitsllc.com/ السبات ناقص الكالسيوم / جلوتاماكس 100X - 100 مل ثيرمو فيشر 35050061 https://www.thermofisher.com/ طلب/كتالوج/منتج/35050079 مكمل B27 50X - 10 مل ثيرمو فيشر 17504044 https://www.thermofisher.com/ طلب / كتالوج / منتج / 17504044 غراء ، مجفف بالتجميد - 100 مجم ورثينجتون LS003119 http://www.worthington- biochem.com/pap/cat.html Neurobasal A متوسط - 500 مل ثيرمو فيشر 10888022 https://www.thermofisher.com/ طلب / كتالوج / منتج / 10888022 البنسلين الستربتومايسين (10,000 وحدة / مل) ثيرمو فيشر 15140122 https://www.thermofisher.com/ طلب / كتالوج / منتج / 15140122 بولي دي ليسين (PDL) هيدروبروميد - 5 ملغ سيجما ألدريتش P6407-5 ملغ http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/sigma/p6407? lang=en®ion=US الفأر لامينين - 1 ملغ ثيرمو فيشر 23017015 https://www.thermofisher.com/ طلب / كتالوج / منتج / 23017015 تريبان بلو - 20 مل سيجما ألدريتش T8154-20 مل http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/sigma/t8154? lang=en®ion=US OptiPrep كثافة التدرج متوسط - 250 مل سيجما ألدريتش D1556-250ML http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/sigma/d1556? lang=en®ion=US ثنائي كلورو ثنائي ميثيل سيلان (DMDCS ، سيجما سيليكوت) سيجما ألدريتش 440272-100 مل http://www.sigmaaldrich.com/ كتالوج/منتج/ألدريتش/440272? lang=en®ion=US كلوروفورم سيجما ألدريتش 288306-1 لتر http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/sial/288306? lang=en®ion=US ماصة زجاجية - 9 بوصة سيجما ألدريتش 13-678-20 ج http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/sigma/cls7095d9? lang=en®ion=US لمبة ماصة - 5 مل سيجما ألدريتش Z186678-3EA http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/aldrich/z186678? lang=en®ion=US&cm_sp=Insite-
_-prodRecCold_xviews-_- prodRecCold10-1 صحن بتري براند® ، زجاج - 60 × 15 مم سيجما ألدريتش BR455717-10 إيه http://www.sigmaaldrich.com/ كتالوج/منتج/aldrich/br455717? lang=en®ion=US لوحة ثقافة الخلايا المعقمة 24 بئر سيجما ألدريتش M8812-100EA http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/sigma/m8812? lang=en®ion=US

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Spinal Cord NeuronsDensity GradientNeuron IsolationTissue DigestionTrituration ProcedureCentrifugation ProtocolLayer CollectionCell SuspensionNeuronal MediumHABG Solution

Related Articles