Method Article

إزالة الخلايا القلبية الرئوية المعقدة: تقنية لإزالة الخلايا من القلب والرئتين من نموذج الفئران

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Mayorca-Guiliani, A. E. et al. إزالة الخلايا من مركب الفئران القلبي الرئوي. J. Vis. Exp. (2021)

يوضح هذا الفيديو طريقة لإنتاج مصفوفة خارج الخلية منزوعة الخلايا أو سقالات ECM عن طريق تطبيق نضح المنظفات من خلال الأوعية الدموية. يمكن بعد ذلك استخدام سقالات ECM الهيكلية لتحليل إعادة تشكيل ECM المرتبطة بأمراض القلب والرئة.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. الجراحة المجهرية بعد الوفاة

  1. قتل الماوس باستخدام غرفة ثاني أكسيد الكربون2.
    1. ضع الماوس في غرفة سعة 4 لتر ، وابدأ في الملء ب 100٪ CO2 ، بدءا من 0.2 لتر / دقيقة لمدة دقيقتين ، وزيادة حتى تصل إلى تدفق 0.8 لتر / دقيقة بعد 3 دقائق. يجب أن يفقد الماوس الوعي خلال أول دقيقتين ، ثم يجب أن يتوقف التنفس (عادة حوالي 5 دقائق ، ولكن يمكن الحفاظ على التدفق حسب الضرورة). تأكيد الوفاة قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.
  2. احلق الصدر والبطن والجزء الخلفي من الفأر باستخدام ماكينة قص الشعر وقم بتطهير الإيثانول بنسبة 70٪. تقلل الحلاقة بشكل كبير من عدد القطع الأثرية بسبب وجود الشعر إما على عينات للتصوير أو التحليل الكيميائي الحيوي.
  3. قم بتثبيت الفأر على صينية البوليسترين ، مع تمديد أطرافه الأمامية والخلفية ، وكذلك رأسه وذيله. ضعه تحت مجهر الجراحة المجهرية.
  4. باستخدام مقص Mayo ذو نمط مستقيم ، قم بإنشاء الوصول الجراحي باستخدام شق جلدي يمتد من المنطقة تحت الفك السفلي إلى أسفل البطن وتشريحه تحت الجلد لكشف جدار الصدر والصفاق.
  5. باستخدام مقص الجراحة المجهرية ، قم بقطع عضلات الصدرية الكبرى والعضلات الصدرية الصغرى على طول المساحة الوربية السادسة على جانبي الجدار الصدري.
  6. باستخدام مقص مستقيم ، قم بقص القص على طول الشقوق السابقة ، ثم أكمل بضع القص عن طريق قطع القص على طول محوره الطويل ، ثم ارفع وقم بتثبيت جانبي جدار الصدر لفضح المركب القلبي الرئوي.
  7. باستخدام ملقط دقيق ذو رؤوس مستديرة (أو ملقط دومون الدقيق) ، قم باستئصال الغدة الصعترية والأنسجة الدهنية المحيطة بها عن طريق سحبها بدقة من ملحقاتها. سيكشف هذا عن السفن الرئيسية.
  8. باستخدام الكي ، قم بكي الوريد الأجوف الهابط ، وباستخدام مقص نمط مستقيم ، قم بقطع المريء.
  9. باستخدام ملقط دقيق حاد ، افصل الأوردة العضدية الرأسية والشرايين العضدية والشرايين السباتية المشتركة اليسرى والشرايين تحت الترقوة اليسرى من الأنسجة الأساسية لتسهيل الربط والكي.
  10. باستخدام حامل الإبرة الدقيقة ، ملقط دقيق حاد وخياطة 9-0 تضع غرز فوق ظهور الشريان السباتي العضدي والشرايين السباتية المشتركة اليسرى والشرايين تحت الترقوة اليسرى.
  11. كي الأوردة العضدية.
  12. افصل الغدد اللعابية تحت الفك السفلي على طول خط الوسط لفضح عضلات الرقبة والقصبة الهوائية. افصل العضلات لفضح الرباط الحلقي للغدة الدرقية. باستخدام مقص دقيق ، افتح مدخلا عن طريق تقسيم الرباط.
  13. أدخل قسطرة 27 جم في القصبة الهوائية وادفعها برفق حتى تتفرع القصبة الهوائية إلى الشعب الهوائية (أي حتى يتم تلبية مقاومة القسطرة ، ثم التراجع 3 مم). احرص على عدم تعطيل الشعب الهوائية. باستخدام خياطة 6-0 ، ضع 3 غرز حول القصبة الهوائية لتأمين القسطرة.
  14. قسم الفأر في ارتفاع الفقرة الصدرية 12. يمتد الشريان الأورطي الهابط إلى الأمام إلى العمود الفقري ويجب تقسيمه هنا مع العمود الفقري. افصل النصف السفلي عن بعضه البعض.
  15. قم بقسطرة الشريان الأورطي برجعية وادفع القسطرة حتى تصل إلى قوس الأبهر. باستخدام خياطة 9-0 ، ضع 4 غرز حول الشريان الأورطي ، بدءا من 5 مم أسفل طرف القسطرة.
< p class = "jove_title" >2. إزالة الخلايا

  1. قم بتوصيل الماوس بنظام المضخة باستخدام أنابيب السيليكون وموصلات Luer. قم بتسخين الماء منزوع الأيونات عند 200 ميكرولتر / دقيقة لمدة 15 دقيقة. حافظ على معدل التدفق هذا أثناء إزالة الخلايا.
  2. قم بتغيير عامل التروية إلى 0.5٪ منزوع أوكسي كولات الصوديوم (DOC) المخفف في الماء منزوع الأيونات وقم بتحريفه طوال الليل.
  3. قم بتغيير عامل التروية إلى 0.1٪ كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) المخففة في الماء منزوع الأيونات وتصريفها لمدة 8 ساعات.
  4. قم بتسخين الماء منزوع الأيونات طوال الليل لغسل SDS و DOC لمدة 24 ساعة.
  5. استئصال القلب والرئتين منزوعة الخلايا عن طريق تقسيم ملحقاتها بالصدر باستخدام مقص منحني وتخزينها في أنبوب تبريد معقم بماء منزوع الأيونات مع 1٪ (حجم / حجم) بنسلين ستربتومايسين و 0.3 ميكرومتر أزيد الصوديوم عند 4 درجات مئوية. يمكن تخزين سقالات ECM لمدة 12 أسبوعا على الأقل. إذا تم استخدام السقالة للتحليل الكيميائي الحيوي (على سبيل المثال ، قياس الطيف الكتلي) ، فقم بالتجميد المفاجئ في النيتروجين السائل.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments الجراحة المجهرية 6-0 خياطة ، إبرة مقطع مثلثة (فيكريل) إيثيكون 6301124 9-0 خياطة دقيقة (سافيل) بي براون G1048611 ملقط Adson أدوات العلوم الدقيقة 11006-12 ملقط Adson بالأسنان أدوات العلوم الدقيقة 11027-12 حامل الإبرة الدقيقة Castroviejo أدوات العلوم الدقيقة 12061-01 غرفة تهوية CO2 للقتل الرحيم للفئران المياه منزوعة الأيونات (Milli-Q IQ 7000 ، نظام مياه المختبر فائق النقاء) ميرك ZIQ7000T0 صينية البوليسترين التي تستخدم لمرة واحدة (~ 30 × 50 سم) مجهر التشريح (Greenough ، مع ذراعين معقوفين) لايكا S6 د ملعقة صغيرة مزدوجة النهايات أدوات العلوم الدقيقة 10091-12 ملقط دومون الدقيق (اثنان) أدوات العلوم الدقيقة 11252-20 ملقط دومون الدقيق مع أطراف 45 درجة أدوات العلوم الدقيقة 11251-35 ماكينة قص الشعر اوستر هاتف: 76998-320-051 حامل إبرة هالسي (مع فكوك كربيد التنجستن) أدوات العلوم الدقيقة 12500-12 قسطرة قياس 24 في الوريد (Insyte) دينار بحريني 381512 قسطرة قياس 26 وريدية (Terumo) سيرفلو دبليو ريال + DM2619WX مقص المايونيز (قص صلب ، مستقيم) أدوات العلوم الدقيقة 14110-15 ملقط دقيق مع أطراف حلقية أسكولاب إف إم 571 آر مقص زنبركي صغير (Vannas ، منحني) أدوات العلوم الدقيقة 15001-08 الإبر (مقياس 27 ؛ ميكرولانس) دينار بحريني 21018 منشفة ورقية (معقمة) أو منديل جراحي مقص مسنن (CeramaCut ، مستقيم) أدوات العلوم الدقيقة 14958-09 ملعقة (Freer-Yasargil) أسكولاب OL166R محاقن (1 مل ؛ بلاستيباك) دينار بحريني 3021001 محاقن (10 مل ؛ بلاستيباك) دينار بحريني 3021110 مقص الأوتار (والتون) أدوات العلوم الدقيقة 14077-09 إزالة الخلايا 70٪ إيثانول (الكحول المطلق 99.9٪) ؛ يجب تعديل الكحول المطلق إلى 70٪ (حجم / حجم) باستخدام الماء منزوع الأيونات برقوق 1680766 المياه منزوعة الأيونات (Milli-Q IQ 7000 ، نظام مياه المختبر فائق النقاء) ميرك ZIQ7000T0 تركيبات الذكور من لور إلى الأنابيب (1/8 بوصة) أدوات الدقة العالمية 13158-100 تركيبات الذكور من لور إلى الأنابيب (1/8 بوصة) أدوات الدقة العالمية 13158-100 PBS (درجة الحموضة 7.4 ، 10× ، جيبكو) ثيرمو فيشر العلمي 70011044 البنسلين - ستربتومايسين جيبكو 15140122 مضخة تمعجية (مع 12 قناة) أولي ديتش 110 تيار متردد (ص) 20 جي 75 أنابيب سيليكون (مع معرف 2 مم و 4 مم OD) أولي ديتش 31399 أزيد الصوديوم سيجما ألدريتش 08591-1ML-F ديوكسي كولات الصوديوم (DOC) سيجما ألدريتش D6750-100G

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cardiopulmonary ComplexDecellularization TechniqueMurine ModelAntegrade PerfusionDetergent SolutionsDeionized WaterDOC PerfusionSDS PerfusionTracheal CatheterizationAortic Arch Catheter

Related Articles