تشريح أنسجة الحنك من نموذج الفئران البالغ: إجراء جراحي لحصاد الحنك الصلب والحنك الرخو من تجويف الفم للفأر البالغ

الملخص

المصدر: Xuan Ngo، Y. et al. عزل وثقافة الخلايا الكيراتينية الفموية الأولية من حنك الفأر البالغ. J. Vis. Exp.(2021)

يوضح هذا الفيديو إجراء جراحيا لتشريح أنسجة الحنك من نموذج الفئران.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تشريح أنسجة الحنك من الفأر البالغ

1. التضحية بفأر C57BL / 6J بالغ (ذكر أو أنثى) عن طريق خلع عنق الرحم وفقا للوائح المنشأة المتعلقة برعاية.
   1. قم بإزالة الشعر حول الفم باستخدام ماكينة حلاقة. باستخدام المقص ، اقطع من الخد باتجاه الفك ، على كلا الجانبين.
      ملاحظه: يحتاج الفأر إلى التخدير قبل التضحية. يتم استخدام خليط مخدر من ميدتوميدين وميدازولام وبوتورفانول (انظر جدول المواد).
2. استخدم الملقط لفتح الفم على مصراعيه وامتصاص أي دم باستخدام قطعة قطن. لتطهير الحنك ، امسح الجزء الداخلي من الفم بقطعة قطن تحتوي على 10٪ من بوفيدون اليود.
3. لحصاد حنك الفأر ، أولا ، استخدم شفرة مشرط جراحية لعمل شق هامشي كامل السماكة على طول جانب الحنك من أسنان الفك العلوي. ثم قم بتشريح الحنك بأكمله بعناية باستخدام raspatorium.
   ملاحظه: raspatorium هي أداة تستخدم لرفع السديلة المخاطية (انظر جدول المواد) (الشكل 1 ب).
4. انقل أنسجة الحنك بسرعة إلى أنبوب سعة 15 مل يحتوي على 4 مل من محلول متوسط كامل + مضاد حيوي مضاد للفطريات. احتفظ بالمناديل على الجليد حتى تصبح جاهزة للحضانة.
   ملاحظه: للجمع من عدة فئران ، يمكن الاحتفاظ بأنسجة الحنك على الجليد لمدة تصل إلى 4 ساعات.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: نظرة عامة على إجراء التشريح وعزل الخلايا الكيراتينية الفموية للفأر. (أ) التمثيل التخطيطي لتجويف الفم في الفأر. (ب) الأدوات المستخدمة لتشريح الحنك وعزل الخلايا الكيراتينية الفموية للفئران. (ج) صورة Brightfield لحنك الفأر. شريط المقياس: 100 ميكرومتر. (د) ملخص البروتوكول.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مقص القزحية موروماتشي كيكاي 14090-09 ميديتوميدين نيبون زينياكو كوجيو دوميتور ميدازولام أستيلاس فارما Dormicum رقم 15 مشرط يمكن التخلص منه ريشة هاتف: 219AABZX00136000 بوتورفانول ميجي سيكا فارما فيتورفال ملقط نصف منحني مركز أبحاث BRC الحيوية بري 13-3376 بوفيدون اليود ساحة واي 872612 Raspatorium # 14 كواحد 8-4599-01 ملقط ناعم مركز أبحاث BRC الحيوية PRI13-3374 مضاد حيوي مضاد للفطريات 100x جيبكو 15240062 15 مل أنبوب مخروطي معقم صقر 352096 قطن كواحد 63-1452-97 مكمل النمو المعرف من EpiLife (EDGS) جيبكو S0120