$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
1. بروتوكول البيئة والصحة والسلامة
- في الليلة التي تسبق بروتوكول البيئة والصحة والسلامة ، ضع الماوس في الغرفة البيئية في درجة حرارة الغرفة (~ 25 درجة مئوية ، ≈30٪ رطوبة نسبية) للتأقلم مع الغرفة.
- استخدم نظام الحصول على البيانات لجمع درجة الحرارة الأساسية المستمرة (Tc) ، بمتوسط 30 ثانية بين عشية وضحاها.
- في صباح يوم بروتوكول البيئة والصحة والسلامة ، تأكد من أن الماوس عند أو أقل من النطاق الطبيعي لدرجة الحرارة النهارية قبل زيادة درجة حرارة الغرفة (أي 36-37.5 درجة مئوية). هذا يضمن عدم إصابة الفأر بالحمى ولم يتعرض لضغوط لا داعي لها خلال هذه الفترة.
- بمجرد أن يصبح الفأر مستقرا وضمن نطاق درجة الحرارة الأساسية الطبيعية للراحة ، قم بإزالة الطعام والماء ووزن. أغلق باب الغرفة وقم بزيادة درجة حرارة الغرفة إلى هدف 37.5 درجة مئوية و 40٪ -50٪ رطوبة نسبية ، أو درجة الحرارة والرطوبة البيئية المطلوبة. تحقق من درجة حرارة الغرفة ورطوبتها باستخدام جهاز مراقبة درجة الحرارة والرطوبة المعايرة.
- أحيط الغرفة بستارة معتمة للحفاظ على الحد الأدنى من الضوء والاضطرابات أثناء البروتوكول. راقب الماوس باستمرار أثناء البروتوكول عبر كاميرات مضيئة بالأشعة تحت الحمراء عن بعد. ركز كاميرا ثانية على جهاز مراقبة درجة الحرارة والرطوبة ، الموضوعة بالقرب من عجلة الجري. قم بإجراء أي تعديلات على وحدة التحكم لنقطة ضبط الغرفة البيئية لضمان قراءات دقيقة لدرجة الحرارة بالقرب من.
- بمجرد أن تصل الغرفة إلى درجة الحرارة المستهدفة كما تم قياسها بواسطة الكاميرا الثانية على جهاز مراقبة درجة الحرارة (قد يستغرق ذلك ~ 30 دقيقة) ، افتح باب الغرفة بسرعة وضع الماوس في عجلة التشغيل القسري.
- ابدأ بروتوكول عجلة الجري القسري بسرعة 2.5 م / دقيقة وقم بزيادة السرعة 0.3 م / دقيقة كل 10 دقائق حتى يصل الماوس إلى Tc 41 درجة مئوية. بمجرد وصول الماوس إلى درجة الحرارة الأساسية هذه ، اسمح للسرعة بالبقاء ثابتة حتى الحد من الأعراض ، والتي تتميز بفقدان واضح للوعي ، والسقوط الخلفي أو الإغماء ، وعدم القدرة على الاستمرار في الجري أو التمسك بالعجلة. تأكد من هذه النقطة الزمنية عندما يكون للماوس ثلاث دورات للخلف على العجلة دون علامات على وجود استجابة جسدية. بدلا من ذلك ، حدد نقطة نهاية إنسانية باتباع قواعد IACUC المحلية لتحديد وقت إيقاف البروتوكول (على سبيل المثال ، عندما يكون Tc ~ 43 درجة مئوية). نقطة النهاية هذه أعلى بقليل من قيود الأعراض في جميع الفئران بشكل أساسي.
- لتنفيذ بروتوكول التبريد السريع (R) ، بمجرد أن يصل الماوس إلى حد الأعراض ، أوقف العجلة ، وقم بإزالتها على الفور من عجلة التشغيل القسري. قم بوزن الماوس وضعه مرة أخرى في قفص منزله للتعافي في درجة حرارة الغرفة. خلال هذا الوقت ، اترك باب الغرفة مفتوحا وأعد نقطة ضبط الحاضنة إلى درجة حرارة الغرفة للسماح للغرفة بالتبريد بسرعة. ينتج عن هذا الإجراء بقاء على قيد الحياة على المدى الطويل بنسبة >99٪.