مقالة منهجية

تركيبات التصوير المدعومة بمرحلة كبد الفأر لتصور الأوعية الدموية القائم على الفحص المجهري متعدد الفوتونات: تقنية تصوير بمساعدة جهاز التثبيت للحصول على صور متعددة الأبعاد للأوعية الدموية في كبد الفأر

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Rongrong ، W. et al. المراقبة المجهرية متعددة الفوتون للأوعية في أنسجة كبد الفأر. J. Vis. Exp. (2021)

يصف هذا الفيديو إجراء تصوير لمراقبة ودراسة الديناميكيات داخل الأوعية الدموية لأنسجة كبد الفأر باستخدام الفحص المجهري متعدد الفوتون بعد تثبيت العضو. يتيح الفحص المجهري متعدد الفوتون تصوير الأنسجة البيولوجية بدقة مكانية عالية في الجسم الحي.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تحضير الماوس

  1. تخدير الماوس
    1. تحضير بنتوباربيتال الصوديوم (50 مجم / كجم) في حقنة.
    2. أمسك بالفأر (ذكر C57BL / 6 البالغ من العمر 8 أسابيع) بيده اليسرى بحيث يكون بطنه متجها لأعلى ورأسه أقل من ذيله. تطهير جلد البطن بالكحول بنسبة 75٪.
    3. أمسك المحقنة في اليد اليمنى ، واثقب الخط الأبيض للبطن بالإبرة قليلا إلى الجانب الأيمن من الجلد بمقدار 3-5 مم. تأكد من أن إبرة المحقنة والجلد بزاوية 45 درجة ، وحقن البنتوباربيتال ببطء في تجويف البطن. بعد الحلاقة ، قم بالتطهير حول موقع شق الفأر 3 مرات بالتناوب مع محلول كحول 75٪ ومحلول الكلورهيكسيدين.
    4. تحقق مما إذا كان التخدير ناجحا بسبب عدم وجود رد فعل صحيح.
  2. حقن الرودامين ب إيزوثيوسيانات ديكستران في الوريد الذيلي.
    1. تحضير 100 ميكرولتر من 10 مجم / مل من الرودامين ب إيزوثيوسيانات ديكستران في حقنة.
    2. امسح ذيل الماوس بالكحول بنسبة 75٪.
    3. أمسك الذيل باليد اليسرى ، وامسك المحقنة في اليد اليمنى بالإبرة الموازية للوريد ، وحقن صبغة 100 ميكرولتر.
    4. أوقف النزيف بقطعة قطن بعد الحقن.
  3. انقع فرو بطن الفأر بشاش مبلل بالماء المعقم ، واحلق بطن الفأر باستخدام ماكينة حلاقة ، مما يجعل السكتات الدماغية في اتجاه الفراء. بعد الحلاقة ، تطهير حول موقع شق الفأر 3 مرات بالتناوب مع 75٪ كحول ومحلول الكلورهيكسيدين.
  4. بعد مسح وسادة التدفئة التي تحتوي على 75٪ كحول ، افتح وسادة التدفئة ، وضع الماوس على ظهره في وسادة التسخين للحفاظ على درجة حرارة جسمه عند 37 درجة مئوية.
< p class = "jove_title" >2. إصلاح كبد الفأر بإطار تصوير أعضاء الجسم

ملاحظة: لم يتم إصدار إطار تصوير الأعضاء التجارية بعد.

  1. ضع كوب شفط نظيف في وضع ثابت.
  2. قم بتركيب تركيبات تصوير الأعضاء (الشكل 1) وامسح وسادة التسخين وكوب الشفط بنسبة 75٪ كحول.
  3. قم بتوصيل كوب الشفط (قطر 5 مم) بخرطوم مضخة التفريغ وقم بتشغيل مضخة التفريغ.
  4. على طاولة معقمة معقمة بالكحول 75٪ ، تطهير حول موقع شق الفأر 3 مرات بالتناوب بمحلول كحول 75٪ ومحلول الكلورهيكسيدين ، ثم يطهر حول موقع شق الفأر 3 مرات بالتناوب بمحلول كحول 75٪ ومحلول الكلورهيكسيدين ، ثم استخدم المقص الجراحي لقطع 2 سم من الجلد من الحد القصي السفلي للفأر وفضح الكبد.
  5. ضع الماوس مع وسادة التسخين على قاعدة الحامل.
  6. اضبط تركيبات تصوير الأعضاء بحيث يحمل اللاصق الشفطي الكبد. ثم استخدم ضغطا سلبيا يتراوح بين 30 و 35 كيلو باسكال للشفط بحيث يلتصق الكبد بكوب الشفط (الشكل 2).
فئة

3. ضبط مجهر المسح الضوئي بالليزر متعدد الفوتون

  1. قم بتشغيل المجهر متعدد الفوتون وحدد الهدف 60x / 1.00 W.
  2. قم بإصلاح الإطار والماوس تحت العدسة الموضوعية.
  3. أضف قطرة من المحلول الملحي العادي الذي يمكن أن يغطي العدسة بأكملها ، وهو مركز كوب الشفط ، واضبط العدسة الموضوعية للمس المحلول الملحي العادي فقط.
  4. انقر نقرا مزدوجا فوق رمز الكمبيوتر لتشغيل برنامج الليزر وتشغيل المفتاح. ثم اضغط مع الاستمرار على زر الطاقة والغالق لمدة 3 ثوان.
  5. اضبط الطول الموجي على 800 نانومتر.
  6. ابدأ تشغيل برنامج تشغيل المجهر باستخدام الكمبيوتر.
  7. لإعداد الاستحواذ ، اضبط Laser 800.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: إطار تصوير أعضاء الجسم.(أ) وسادة التدفئة: تحافظ على درجة حرارة جسم الماوس. (ب) القوس: يمكن أن توفر قاعدة لوضع الماوس وموضع كوب الشفط القابل للتعديل بمقابض. (ج) كوب الشفط: يتم تثبيته بواسطة القوس. يتسبب الضغط السلبي الذي توفره مضخة الضغط السلبي في امتصاص الكبد للعدسة الشفافة في وسط كوب الشفط. (د) ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 1 مل حقنة × 2 تقنية هونان بينان للأجهزة الطبية يو 0551 وسادة تسخين 5 واط تقنية BiolinkOptics ب 336 75٪ إيثانول مطلق قوانغدونغ قوانغهوا العلوم والتكنولوجيا 1.17113.023 كرة قطنية ماصة مملكة الصرف الصحي الصحي أداة جراحية للفأر RWD علوم الحياة SP0001-ج بما في ذلك المقص والملاقط الفحص المجهري متعدد الفوتون أوليمبوس FV1200MPE تركيبات تصوير الأعضاء تقنية BiolinkOptics ب 336 بما في ذلك كوب الشفط والخرطوم ومضخة الضغط السلبي والقوس الرودامين ب إيزوثيوسيانات-ديكستران سيغما R9379 البنتوباربيتال الصوديوم سيغما P3761-25G ماكينة الحلاقة لي وا RE-3201

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة