نموذج التهاب البنكرياس الصفراوي الحاد: طريقة لتوليد نموذج فأر التهاب البنكرياس الصفراوي الحاد عن طريق تسريب قناة البنكرياس

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تخدير بالزيلازين (10 ملغ/كغ) ومحلول الكيتامين (80 ملغ/كغ) تحت الجلد (0.1 مل/10 جم من وزن الجسم) باستخدام حقنة 1 مل وإبرة 13 × 0.45 مم 26 جم 1/2. تحقق من عمق التخدير الكافي عن طريق الضغط على إصبع القدم. تحكم في درجة حرارة الجسم باستخدام وسادات ساخنة. تأكد من أن جميع المواد الجراحية معقمة.
2. نظف منطقة البطن بمحلول بوفيدون اليود بنسبة 5٪ واستخدم أداة تشذيب لإزالة الشعر بين الصدر وأسفل البطن (حوالي 2^{سم 2}). نظف منطقة الجراحة بالكحول بنسبة 70٪.
3. شل حركة على السبورة الجراحية باستخدام شريط جراحي. استخدم المقص لقطع 5 مم من الجلد أفقيا ، في الجزء العلوي من البطن و 1 سم تحت عملية الخنجري. كرر القطع على الصفاق. سيؤدي ذلك إلى شق البطن مع الحد الأدنى من التعرض للتجويف.

2. تحديد موقع البنكرياس وتعريضه

1. بمساعدة ضام ، اسحب الكبد نحو رأس الفأر ، ~ 1 سم من الأمعاء.
2. حدد موقع منطقة البنكرياس التي سيتم حقنها بكثرة التاجوكولات الصوديوم (رأس البنكرياس). حدد موقع الاثني عشر بالإشارة إلى الكبد - أسفل الكبد ، على الجانب الأيمن (على اليسار أثناء عرض الفأر). الاثني عشر هو الجزء الأول من الأمعاء الدقيقة ومتصل بالجزء الأخير من المعدة.
3. بمساعدة الملقط ، ارفع الكبد باتجاه رأس ، واسحب جزء الأمعاء الدقيقة برفق. قم بإصلاح الطرفين الجانبيين للأمعاء الدقيقة بخياطة 6-0 من مادة البولي بروبيلين لرؤية الجزء البعيد من القناة الصفراوية المشتركة بشكل أفضل.

3. تحريض التهاب البنكرياس الحاد الشديد

1. قم بإغلاق القناة الصفراوية المشتركة القريبة مؤقتا بمشبك الأوعية الدموية الدقيقة لمنع التسريب المرتجع من التسرب إلى الكبد. يمكن رؤية القناة الصفراوية المشتركة على جانب الكبد من الاثني عشر وسيظهر تقاطعها مع الاثني عشر أبيض. تعريض العضو خارج تجويف البطن.
2. ثقب المنطقة حول الأمعاء الدقيقة (الجزء الأبيض من جدار الأمعاء الدقيقة) للوصول إلى القناة الصفراوية المشتركة بإبرة 0.4 مم متصلة بأنبوب بولي إيثيلين 0.54 مم.
3. قم بإجراء انسداد مؤقت للقناة الصفراوية المشتركة البعيدة مع 8-0 خياطة لمنع محلول توروكولات الصوديوم من التسرب إلى الاثني عشر.
4. ابدأ مضخة التسريب وقم ببرمجة محلول توروكولات الصوديوم 2.5٪ (مخفف في محلول ملحي 0.9٪) بسرعة ثابتة تبلغ 10 ميكرولتر / 10 جم من وزن الجسم لمدة 3 دقائق.
5. بعد التسريب ، قم بإزالة مشبك الأوعية الدقيقة ، المؤقت 8-0 خياطة ، وإبرة الحقن من قناة البنكرياس الصفراوية لإعادة تشكيل التدفق الفسيولوجي للصفراء.
6. في النهاية ، قم بخياطة البطن بخياطة بولي بروبيلين أحادية الشعيرات 6-0 غير ماصة. يجب أن يكون الوقت بين شق البطن والخياطة النهائية 30 دقيقة كحد أقصى (انظر الشكل 1).
7. بعد الجراحة ، ضع في صناديق بولي إيثيلين مبطنة بنشارة الخشب والماء والطعام المجاني.
8. تعامل مع الفئران الضابطة بنفس طريقة الفئران التجريبية ولكن تأكد من أن الغرق يتكون من محلول ملحي فقط. إجراء العملية الجراحية وتسريب محلول ملحي (10 مل / دقيقة ، لمدة 3 دقائق) في مجموعة تحكم (SHAM) للقضاء على التحيز الالتهابي الناجم عن الجراحة والقنية.
9. استخدم الترامادول 12.5 مجم / كجم تحت الجلد كل 8 ساعات ، بدءا من التعافي بعد الجراحة.

الشكل 1: مخططات تحريض التهاب البنكرياس الحاد الشديد بواسطة 2.5٪ توروكولات الصوديوم في الفئران C57BL / 6. (أ) المرارة. (ب) القناة الصفراوية المشتركة ؛ (ج) قناة البنكرياس. (د) الوريد البابي؛ (ه) مشبك الأوعية الدقيقة؛ (و) موقع الثقب (إبرة متصلة بأنبوب بولي إيثيلين ومتصلة بمضخة التسريب) ؛ (ز) تثبيت الإبرة المؤقت في القناة الصفراوية المشتركة.