استرجاع أجنة الفئران قبل الولادة: إجراء لحصاد الأجنة من الفأر الحامل

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Yun، K. تقييم عيوب انسداد تقاطع المسالك البولية عن طريق حقن صبغة الميثيلين الزرقاء. J. Vis. Exp.(2017)

يوضح هذا الفيديو استرجاع الأجنة من فأر حامل. يمكن استخدام أجنة الفترة المحيطة بالولادة المستردة كأنظمة نموذجية لدراسة نمو الثدييات.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تشريح أجنة ما قبل الولادة

1. نظف المقص والملقط التشريح بنسبة 70٪ من الإيثانول.
2. لجمع الأجنة في الفترة المحيطة بالولادة عند E18.5 أو E19.5 ، قم بالقتل الرحيم للفئران الحامل أولا باستخدام استنشاق ثاني أكسيد الكربون₂ ثم قم بإجراء خلع عنق الرحم وفقا للإرشادات الأخلاقية.
   ملاحظه: عادة ما تلد أنثى الفأر الحامل بدءا من E18.5 ، ومع ذلك ، يسهل التلاعب بالكلى الكبيرة. لذلك ، من الأسهل إجراء هذا التحليل على الكلى عند E19.5 بالقرب من الولادة. ومع ذلك ، يموت الجراء الذين يعانون من انسداد المسالك البولية الثنائي بعد الولادة. اعتمادا على خصائص الفئران التجريبية ، يجب تحديد يوم / وقت التجميع المناسب تجريبيا.
3. رش 70٪ من الإيثانول على سطح البطن البطني ثم افتح تجويف البطن بطنيا باستخدام مقص تشريح وملقط.
4. ارفع الرحم بالكامل وافصله عن الجسم عن طريق القطع بمقص تشريح عند أطراف قرون الرحم.
5. اشطف الرحم بالكامل باستخدام 1x PBS في طبق بتري.
6. اقطع الرحم بشكل مقطعي باستخدام مقص تشريح وقم بإزالة المشيمة بملقط تشريح لفضح الأجنة في أكياس الصفار
.
7. قم بإزالة كيس الصفار أولا ثم قم بإزالة الغشاء الأمنيوسي باستخدام ملقط تشريح لتحرير الأجنة في الفترة المحيطة بالولادة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مقص التشغيل الدقيق شركة روبوز للأدوات الجراحية RS-6702 ملقط تشريح دقيق شركة روبوز للأدوات الجراحية RS-5135 دومونت ملاقط. نمط # 5 شركة روبوز للأدوات الجراحية RS-5045 كواليتي بيولوجي إنك نورمال سالين - 500 مل فيشرسبايند 50-983-204