عزل مبيض الفئران حديثي الولادة: إجراء جراحي لحصاد زوج من المبايض من نموذج الفأر حديثي الولادة

الملخص

المصدر: et al. Morgan ، S. الثقافة والثقافة المشتركة لمبايض الفئران وبصيلات المبيض. J. Vis. Exp. (2015).

في هذا الفيديو ، نصف إجراء جراحيا لعزل المبايض عن فأر حديثي الولادة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تشريح المبيض حديثي الولادة وثقافته

1. ضع 1 مل من وسط التشريح (قم بإذابة 3 مجم / مل BSA في وسط Leibowitz L15 وقم بتعقيمه من خلال مرشح مسام 0.2 ميكرومتر وقطر 25 مم) في كل طبق جنين زجاجي معقم.
2. إعدام صغار الفئران حديثي الولادة الذين تتراوح أعمارهم بين اليوم 0 و 5 بعد الولادة ، وإعدامهم بقطع الرأس.
3. أمسك الجلد الذي يغطي جدار البطن باستخدام زوج من ملقط التشريح الدقيق وقم بعمل شق كبير في الجلد وجدار الجسم. اسحب الشق حتى ينكشف البطن بالكامل. عادة ما تكون المثانة محتقنة في هذه المرحلة ويمكن ثقبها لتسهيل التشريح.
4. حرك الشجاعة بعيدا عن الطريق باستخدام ملقط صانع الساعات. اتبع قرون الرحم من المثانة إلى الكلى على كل جانب. يقع المبيض أسفل الكلية مباشرة في الجزء العلوي من الرحم وسيظهر كهيكل يشبه السحابة تحت مجهر تشريح.
5. أمسك المبيض برفق باستخدام ملقط صانع الساعات واستخدم المقص لقطع التصاق بالرحم. انقل زوج المبايض إلى أطباق جنينية تحتوي على وسط تشريح مسبق التسخين.
6. إجراء تشريح دقيق للمبايض تحت مجهر التشريح على مرحلة ساخنة (37 درجة مئوية). استخدم إبر الأنسولين لتقليم الكيس الجرابي وأي مواد زائدة بما في ذلك قناة فالوب ، حتى يبقى المبيض فقط.
7. انقل كل مبيض إلى بئر صفيحة الاستزراع باستخدام ماصة زجاجية منحنية مسحوبة بدقة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ليبوفيتز L15 إنفيتروجين 11415049 α ميم إنفيتروجين 22571020 يتم توفيره على شكل بيكربونات الصوديوم المخزنة (2,200 مجم / لتر) ألبومين مصل الأبقار سيجما ألدريتش أ 9418 لوسط التشريح ألبومين مصل الأبقار سيجما ألدريتش أ 3311 لوسط الثقافة ألبومين مصل الأبقار سيجما ألدريتش أ 2153 لطلاء الماصات الزجاجية FSH ميرك سيرونو جونال ف غالبا ما يكون اختبار الدفعات ضروريا. قم بتكوين محلول مخزون من 1IU / 10μL في αMEM وتخزينه عند -20 درجة مئوية مرشحات الحقن (25 مم ، 0.2 ميكرومتر) غرينر 16532 ك مرشح أسيتات السليلوز لتصفية كميات أكبر (>5 مل) من المتوسط. أنابيب معقمة غرينر 187261 طبق 24 بئر غرينر 662160 [م] إبر الأنسولين مستلزمات طبية BD 037-7606 0.33 مم (29 جم) + 1 مل أطباق الأجنة الزجاجية VWR 720-0579 تعقيمها ثم تدفئها قبل الاستخدام الماصات الزجاجية فيشر ساينتيك 10209381 BSA المغلفة قبل الاستخدام إبر الوخز بالإبر أكوديميديك المحدودة 30 مم × 0.25 النوع C محلول فورمالين ، مخزن محايد ، 10٪ سيجما ألدريتش HT5014-120 مل أغشية النوكليوبور Whatman كاملاب WN / 110414 استخدم سطحا لامعا ، بولي كربونات ، قطر 13 مم ، حجم مسام 8.0 ميكرومتر