نموذج الفئران لزرع الجزر: طريقة جراحية لحقن جزر البنكرياس في الوريد البابي والوقاية من نزيف ما بعد الجراحة

الملخص

المصدر: Gou ، W. et al. تقليل نزيف الوريد البابي بعد التسريب أثناء زرع جزيرة داخل الكبد في الفئران. J. Vis. Exp. (2021)

في هذا الفيديو ، نصف إجراء لحقن خلايا جزيرة البنكرياس في الوريد البابي الكبدي ، متبوعا بتطبيق رغوة الجل لمنع النزيف بنجاح. يعد نزيف ما بعد الجراحة سببا شائعا لارتفاع معدل الوفيات أثناء زرع الجزيرات.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. زرع الجزر

1. تحفيز وصيانة الفأر تحت التخدير العام مع 2٪ أيزوفلوران. تحقق من عدم وجود ردود أفعال الدواسة لضمان التخدير المناسب للحيوان.
2. احلق وقم بإزالة الفراء في منطقة البطن بالفأر.
3. يجب تطبيق جرعة واحدة قبل الجراحة من البوبرينورفين (0.1 ملغم/كغ الداخل الصالحي).
4. تطهير المنطقة الجراحية بثلاث مناديل متناوبة من 2٪ يود و 75٪ كحول.
5. قم بإجراء شق البطن بمقص صغير لعمل شق 1-1.5 سم.
6. افتح التجويف البريتوني بضام. اتبع إما الطريقة أ أو الطريقة ب كما هو مفصل أدناه.

< p class = "jove_title" > الطريقة أ: (توقف عن النزيف باستخدام رغوة الجل ، الشكل 1 أ)

1. تحضير الماوس
   1. ضع شاشا معقما حول الشق.
   2. اسحب الأمعاء برفق باستخدام ملقط واحتفظ بها على الشاش.
   3. حدد وريد البوابة من خلال موقعه وفضحه جيدا.
   4. قم بتغطية الأمعاء بشاش دافئ مبلل بالمحلول الملحي أثناء الجراحة بأكملها.
2. أدخل إبرة حقنة الأنسولين المحملة مسبقا من خلال الوريد البابي بالقرب من الاثني عشر (الشكل 1 ب). للقيام بذلك ، أمسك الإبرة بحيث يكون الثقب (شطبة) متجها لأسفل وضع زاوية سطح الفتح موازية لجدار الوريد البوابي قبل اختراق الجدار.
   1. اسحب المكبس لسحب بعض الدم (20-50 ميكرولتر) في المحقنة لخلط الجزر أولا.
   2. قم بغرس الجزر الصغيرة في وريد البوابة ببطء أثناء سحب الغطس ودفعه بشكل متكرر.
   3. ضع قطعة من رغوة الجل (بحجم حوالي 0.5 سم × 0.5 سم) لتغطية موقع الحقن.
   4. اضغط على رغوة الجل لأسفل بطرف قطني أثناء سحب الإبرة من الوريد البابي.
   5. استمر في الضغط على الجل لمدة دقيقتين تقريبا للتأكد من عدم وجود نزيف نشط.
   6. قم بتدوير طرف القطن بعيدا عن رغوة الجل للتأكد من أن رغوة الجل تغطي الوريد البابي جيدا.

< p class = "jove_title" >الطريقة ب: (توقف عن النزيف باستخدام وسادة الدهون ، الشكل 1 ج)

1. كشف الوريد البابي جيدا.
   1. استخدم طرفين قطنيين لتثبيت الوريد البابي المكشوف من الجانبين الأيسر والأيمن.
   2. تحديد وسادة الأنسجة الدهنية بين الاثني عشر والوريد البابي.
   3. اخترق الوسادة الدهنية قبل إدخال الإبرة في الوريد البابي (الشكل 1 د).
   4. قم بغرس الجزر باتباع الإجراء المماثل الموضح أعلاه في الطريقة أ.
   5. اسحب الإبرة للخارج أثناء الضغط على الدهون برأس قطني.
   6. استمر في الضغط على وسادة الدهون لمدة 1 دقيقة بعد إزالة الإبرة.
2. بعد التأكد من عدم وجود نزيف من الوريد البابي ، أعد الأمعاء برفق إلى التجويف البريتوني في موضعه الأصلي.
3. اترك 0.5 مل من المحلول الملحي الدافئ (36-37 درجة مئوية) في تجويف البطن قبل الإغلاق.
   ملاحظه: يسهل المحلول الملحي الدافئ حركة الأمعاء والتعافي بعد الجراحة ويمنع نخر الأمعاء.
4. أغلق طبقة العضلات بخياطة 5-0.
5. أغلق طبقة الجلد بخياطة 4-0.
6. ضع الماوس في قفص نظيف على وسادة تدفئة حتى يتعافى تماما من التخدير.
7. استمر في توفير مسكن (على سبيل المثال ، بوبرينورفين 0.1 مجم / كجم من الداخل الداخلي) كل 12 ساعة والحرارة التكميلية لمدة 48 ساعة بعد الجراحة.
   ملاحظة: تستغرق عملية زرع الجزر حوالي 15-20 دقيقة حتى تكتمل.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: رسم توضيحي لإجراءات زرع جزيرة داخل الكبد.(أ ، ج). مخططات للخطوات الرئيسية المستخدمة في الطريقة A والطريقة B. (B، D). تم حقن الجزر مباشرة عبر الوريد البابي (C) أو بشكل غير مباشر عن طريق الدهون (D).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 10٪ فورمالين محايد مخزن V / V فيشر ساينتيك 23426796 1 مل حقنة مع إبرة AHS AH01T 20 مل حقنة دينار بحريني 301031 25 جم × 5/8 "إبر تحت الجلد دينار بحريني 305122 ضمادات تحضير الكحول ، معقمة فيشر ساينتيك 22-363-750 نظام التخدير الحيواني شركة VetEquip، Inc. شركة 901806 بوبرينورفين هيدروكلوريد ، حقن بار المنتجات المعقمة ذ.م.م رقم الحوار الوطني 42023-179-05 الإيثانول المطلق (200 برهان) ، درجة البيولوجيا الجزيئية فيشر ساينتيك BP2818500 مقص تشريح دقيق فائق الدقة 4 بوصة مستقيم حاد شركة روبوز للأدوات الجراحية RS-5882 جل فوم (إسفنجة جيلاتين قابلة للامتصاص USP) شركة فارماسيا وأبجون 34201 ملقط Graefe 4 "طرف حساس للغاية شركة روبوز للأدوات الجراحية RS-5136 وسادة ساخنة الامازون B07HMKMBKM حامل إبرة هيغار بومغارتنر 5.25 بوصة شركة روبوز للأدوات الجراحية RS-7850 حقنة الأنسولين بإبرة قياس 27 دينار بحريني 879588 منصات اليود الإعدادية فيشر ساينتيك 19-027048 إيزوفلوران بيرامال للعناية الحرجة NDC 66794-017-25 خياطة البولي بروبلين 4-0 ميد فيت الدولية MV-8683 خياطة البولي بروبلين 5-0 ميد فيت الدولية MV-8661 كلوريد الصوديوم، محلول وريدي 0.9٪ VWR 2ب1322 س الستارة الجراحية ، معقمة ميد فيت الدولية الطراز DR1826