حصاد المبيض السليم من الفأر: إجراء جراحي لعزل المبيض الكامل من نموذج الفئران

الملخص

المصدر: Mason ، J. B. et al. إجراءات زرع المبيض لتقويم العظام للتحقيق في تأثير شيخوخة المبيض على مدى الحياة والصحة في إناث الفئران.

في هذا الفيديو ، نصف إجراء جراحيا لحصاد المبيض السليم من نموذج الفأر.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. زرع المبايض السليمة للفئران المسنة

ملاحظة: يصف هذا البروتوكول الإجراء المستخدم أثناء نقل المبايض من فأر صغير (60 يوما من العمر) إلى أنثى ما بعد الإنجاب (12 شهرا من العمر) من نفس السلالة الفطرية. يتم استخدام نفس الإجراء لزرع المبيض بين أي فأرتين من الفئران.

1. وزن وتخدير المتبرع عن طريق الحقن داخل الصفاق (IP، إبرة 27 ga)، على سبيل المثال باستخدام مزيج من الكيتامين والزيلازين والأسيبرومازين (65 ملغ/كغ من الكيتامين، 13 ملغ/كغ زيلازين 2.0 ملغ/كغ، أسيبرومازين؛ جرعة الكوكتيل - 6.5 مل/كغ). أعد إلى قفص المنزل الساخن حتى يصبح التخدير ساري المفعول.
2. بمجرد التخدير ، أخرج من قفص المنزل وضعه على مناشف ورقية ساخنة. باستخدام المقص (يفضل شفرة # 40) ، قم بإزالة الشعر بضعة مم من خط الوسط إلى خط الوسط على كل جانب ، بدءا من أسفل الأضلاع مباشرة والتحرك بعيدا ، وإعداد "رقعة" مقطوعة بمساحة 2-3 سم مربعة تقريبا على جانبي الفأر العرضة تاركا شريطا من الشعر حوالي 1-2 سم يغطي خط الوسط.
3. امسح المناطق المقطوعة برفق باستخدام 70٪ من الإيثانول وقم بتطبيق محلول البيتادين على الموقع المقطوع باستخدام مسحة قطنية.
4. ضع جل المضادات الحيوية لحماية العين وقم بتطبيق ميلوكسيكام (2.0 مجم / كجم) تحت الجلد (SC ، إبرة 27 ga) على الجانب الجانبي من عنق لتخفيف الآلام بعد الجراحة.
5. ضع في وضع الانبطاح على حقل جراحي معقم ساخن وامسح المنطقة المقطوعة بشاش قطني مبلل بالإيثانول بنسبة 70٪ 2 سم × 2 سم.
6. قم بعمل شق من 1.0 إلى 1.5 سم وقم بتشريح الجلد بصراحة من اللفافة الأساسية. قم بعمل شق آخر من خلال اللفافة. تشريح بصراحة بشكل جانبي تحت هذه اللفافة بشكل سطحي قدر الإمكان حتى تصل إلى تجويف البطن
7. ضع ستارة جراحية صغيرة فوق الشق (مقطوع من شاش 2 سم × 2 سم) وبلل الستارة بمحلول ملحي معقم.
8. باستخدام ملقط صغير ، حدد موقع الأنسجة الدهنية المحيطة بالمبيض في تجويف البطن واستخرج الوسادة الدهنية والمبيض برفق وضعها على ستارة الشاش المبللة. ستظهر وسادة دهون المبيض "أكثر بياضا" من الأنسجة الدهنية المحيطة.
9. ضع مشبك بولدوج مقاس 1.5 بوصة على وسادة الدهون (مع الحرص على عدم انسداد الجراب المبيضي) لتثبيت المسالك في مكانها أثناء العملية.
10. حرك المجهر التشريحي إلى مكانه وحدد بوضوح الجراب المبيضي. أمسك الجراب بملقطين لصانع الساعات وشق الجراب المبيضي مقابل نقير المبيض لكشف المبيض. إذا كانت منطقة الوصول المقصودة من الجراب شديدة الأوعية الدموية ، فضع قطرة من الأدرينالين (1: 100،000) مع حقنة على سطح الجراب لتقليل النزيف في وقت التمزق.
11. قم بإزالة المبيض برفق من جراب المبيض واستئصال المبيض عن طريق تثبيت نقير المبيض باستخدام ملقط صانع الساعات لمنع النزيف.
12. ضع المبيض المتبرع في زجاج الساعة المملوء بمحلول ملحي معقم 4 درجات مئوية ، وقم بتغطيته بشكل غير محكم ، واتركه جانبا حتى يصبح جاهزا للزراعة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات تشريح المجهر أي نطاق تشريح بمسافة عمل قابلة للتعديل. جهاز تدوير الماء الدافئ والوسادة المناسبة لمجال الجراحة / التعافي بحجمك. سترايكر / جايمار تي بي 700 تنتج وسادات المياه المتداولة مجالات تشغيل واسترداد درجة حرارة متساوية ومتسقة. أدوات التشريح الجراحية للوصول إلى الجهاز التناسلي اختيار الأدوات الجراحية المحددة خاص بالجراح للغاية مادة خياطة لجراب المبيض الغرز الإلكترونية 2809 جم: 9-0 أو 2810 جم: 10-0 إثيلون أسود 5 بوصات BV130-5 تفتق قد يكون من الصعب تحديد موقع خياطة 10-0 إذا سقطت في ميدان الجراحة. إسفنجة جيلاتين قابلة للامتصاص شركه فايزر جل فوم- فايزر 09-0315-08 مقطعة إلى قطع صغيرة (~ 2 مم) في ظل ظروف معقمة. دبابيس لإغلاق البشرة بيكتون ديكنسون مشبك أوتوكليب MikRon 9 مم (BD 427631) مرهم العين. شركة MWI للإمدادات البيطرية مرهم عيون معقم Puralube محاقن للتخدير والمسكن والإبينفرين شركة MWI للتوريد البيطري 305536 دينار بحريني 27 جم × 3/8 بوصة ، شطبة داخل الأدمة 1/2 مل محاقن للمحلول الملحي. شركة MWI للتوريد البيطري دينار بحريني 309657. حقنة 3 مل ، طرف لوير لوك ، إبرة 27 جرام كليبرز / شفرة أنديس ماكينة قص الشفرة اللاسلكية القابلة للفصل Super AGR + ™ وشفرة CeramicEdge® # 40. أي مقص بشفرة دقيقة. ايثانول الإمداد الكيميائي بالجامعة خفف إلى 70٪ للاستخدام. محلول البيتادين شركة MWI للإمدادات البيطرية 3233 2x2 وسادات شاش شركة MWI للإمدادات البيطرية 3073 تعقيم مع حزم الجراحة حبات زجاجية من البورسليكات شركة سيجما ألدريتش Z273619 الأوتوكلاف في قوارير التنبذ 4-فينيل سيكلوهيكسين ديبوكسيد شركة سيجما ألدريتش 94956