$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. تحضير الفئران وإدخال قسطرة في الوريد الوداجي
< p class = "jove_content" >
ملاحظة: هنا ، تم استخدام الفئران المراسلة mTmG البالغة من العمر 5-7 أسابيع من الذكور أو الإناث (B6.129 (Cg)
Gt (ROSA) 26Sortm4 (ACTBtdTomato، -EGFP) Luo10) مع الفئران Pf4-cre ، مما يسمح بوضع العلامات الفلورية الخضراء المكثفة في الخلايا الضخمة والصفائح الدموية. قبل البدء في التجربة ، قم بتسخين غرفة التسخين في المجهر لبضع ساعات.
- انقل الماوس إلى غرفة التصوير وانتقل إلى التخدير.
- تخدير الفأر عن طريق الحقن داخل الصفاق (IP) لمحلول الكيتامين (الكيتامين (100 ميكروغرام / جم) والزيلازين (10 ميكروغرام / جم) (5 ميكرولتر / ز).
ملاحظه: يتم استخدام الإعطاء المتكرر للكيتامين / الزيلازين هنا ويعمل بشكل جيد ولكنه يتطلب انقطاع التسجيل لإعادة الحقن بانتظام. بدلا من ذلك ، إذا كانت آلة التخدير متوفرة ، فيمكن إجراء تحريض التخدير باستخدام الكيتامين / الزيلازين ثم الحفاظ عليه تحت استنشاق الغازات (خليط من الأيزوفلوران والهواء والأكسجين).
- استبدل في قفصه حتى يصل إلى التخدير العميق. ضع الماوس على طبق ساخن دافئ عند 37 درجة مئوية لجميع عمليات التلاعب اللاحقة.
ملاحظه: بينما يصل إلى التخدير العميق ، قم بتشغيل المجهر وجميع المعدات وقم بإعداد المعلمات المختلفة اللازمة لبدء التجربة بمجرد الانتهاء من الجراحة. هنا ، يستمر الإجراء 3 ساعات فقط وهو نهائي. يتم القتل الرحيم للفأر بعد التجربة دون الاستيقاظ. وبالتالي ، فإن تطهير الإيثانول للبشرة والأدوات كاف. ومع ذلك ، اعتمادا على الإرشادات المؤسسية ، أو إذا كان الإجراء سيستمر لفترة أطول ، يجب استخدام طرق تطهير أكثر اكتمالا مثل ثلاث دعك بالتناوب مع البيتادين / بوفيدون والكحول.
2. قم بتركيب قسطرة في الوريد الوداجي.
ملاحظة: من المهم تجنب التلوث الميكروبي أثناء الجراحة قدر الإمكان. احرص على تطهير الجلد بعناية باستخدام 70٪ من الإيثانول (EtOH) قبل الشروع في الجراحة. استخدم دائما مقصا وملاقط معقمة ، واشطفها بانتظام بنسبة 70٪ EtOH. اعمل في مكان نظيف وارتد قناعا للوجه. يتم استخدام قسطرة 22 جم "فوق الإبرة" ، تتكون من إبرة داخل أنبوب بلاستيكي ، للحقن في الوريد (انظر جدول المواد).
- ضع الفأر على ظهره وثبت الأرجل الأمامية بشريط جراحي لتمديد الحلق (الشكل 1 أ). تطهير الحلق بنسبة 70٪ من الإيثانول.
ملاحظه: للراحة ، يمكن حلق الحلق قبل الجراحة. إذا استمر الإجراء لفترة أطول ، فيجب إجراء حلاقة دقيقة للحصول على تقنية التعقيم المناسبة.
- قم بعمل شق 0.7-1 سم على الوريد الوداجي الأيمن أو الأيسر باستخدام مقص معقم. قم بتمديد النسيج الضام المجاور لفضح الوريد الوداجي الخارجي والجزء العلوي من العضلة الصدرية (الشكل 1 أ).
- املأ القسطرة بمحلول ملحي فسيولوجي دافئ ومعقم. أدخل القسطرة في الوريد بعد اختراق العضلة الصدرية (الشكل 1 ب).
ملاحظه: احرص على تجنب فقاعات الهواء داخل القسطرة. من المهم إدخال القسطرة عبر العضلات لمنع النزيف لأن العضلة ستشكل نقطة ضغط. حتى الفئران المصابة بعيوب الإرقاء ، مثل الفئران Itgb3 - / - ، لا تنزف عند إدخال القسطرة بهذا النهج.
- قم بإزالة الإبرة برفق ، وإذا لزم الأمر ، حرك القسطرة بعناية في عمق الوريد. قم بتوصيل المحقنة وتثبيت القسطرة عن طريق إضافة قطرة من الغراء الجراحي (جدول المواد).
ملاحظه: من الممكن إدخال قسطرة داخل الوريد الذيل ، على الرغم من أنها تتطلب بعض الممارسة لأن الوريد له عيار أصغر. هذا صعب بشكل خاص عند استخدام الفئران ذات الشعر الداكن ، والتي يصعب رؤية وريد ذيلها. نظرا لعيارها الأكبر ، فإن وضع القسطرة داخل الوريد الوداجي قد يسمح بحقن كميات أكبر أو علاجات متكررة بشكل أكثر موثوقية. يرجى ملاحظة أن المحقنة تمتلئ في المرة الأولى بمحلول ملحي دافئ ، ولا تنس حقن الحجم الميت قبل حقن محلول الدواء.
- أعد الماوس بعناية إلى وضع الانبطاح (الشكل 1 ج). ضع الجل (جدول المواد) على العينين لمنع الجفاف.
