تركيب نافذة التصوير داخل البنكرياس في نموذج الماوس: نافذة تصوير بنكرياس متكاملة للتصوير المتتابع في الجسم الحي للبنية المجهرية لبنكرياس الفئران

الملخص

المصدر: Park ، I. et al. التصور الخلوي الطولي المستقر في الجسم الحي للبنكرياس في نموذج الفئران مع نافذة تصوير البنكرياس داخل الحيوية. J. Vis. Exp. (2021)

يوضح هذا الفيديو إجراء زرع نافذة تصوير البنكرياس لفصل البنكرياس عن الأمعاء للتصوير الطولي عالي الدقة للبنية المجهرية للبنكرياس.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< ص الفئة = "jove_title" >1. الجراحة

1. قم بإعداد منصة جراحية معقمة وتعقيم الأسطح بنسبة 70٪ من الإيثانول.< / > ملاحظه: بالنسبة لجلسات التصوير الطولية ، تعد تقنية التعقيم ضرورية.
2. تخدير الفئران بمزيج من التيتيتامين / الزولازيبام (30 مجم / كجم) والزيلازين (10 مجم / كجم).
   ملاحظه: يوصى باستخدام التيليتامين / الزولازيبام بدلا من الكيتامين بسبب تأثيره الضار على ارتفاع السكر في الدم. يجب اختيار التخدير الأمثل لغرض التجربة.
3. راقب درجة حرارة الجسم باستخدام مسبار المستقيم مع وسادة تسخين يتم التحكم فيها حرارة.
4. احلق الجانب الأيسر من الفأر وقم بتطبيق ثلاث جولات من الكحول المتناوب والمقشر القائم على اليود.
   ملاحظه: إذا تم استخدام كريم إزالة الشعر ، فلا تتركه أكثر من 1 دقيقة لتجنب الحرق الكيميائي.
5. قم بعمل شق 1.5 سم على الجانب الأيسر من الفأر وتشريح الجلد والعضلات.
6. قم بإجراء خياطة سلسلة محفظة بخياطة سوداء أو نايلون 4-0 في هامش الشق.
7. استخدم ضام دقيق على الشق وكشف الطحال برفق.
8. تجمع الطحال بعناية باستخدام ملقط حلقي وحدد البنكرياس.
9. ضع النافذة على جانب الماوس ومرر الطحال والبنكرياس عبر المساحة المفتوحة للنافذة. يجب أن يكون التلاعب بالبنكرياس لطيفا جدا لأنه يمكن أن يسبب نزيفا أو التهاب البنكرياس.
   ملاحظه: صمم بشكل مخصص نافذة التصوير داخل البنكرياس لعزل البنكرياس عن الأمعاء في تجويف البطن (الشكل 1 أ ، ب).
10. ضع البنكرياس برفق على لوحة نافذة التصوير ؛ سيتم وضع الطحال على المساحة المفتوحة للنافذة.
11. ضع قطرات من غراء N-butyl cyanoacrylate على هامش نافذة التصوير.
    1. لتقليل كمية الغراء المطبق ، استخدم إبرة قسطرة 31 جم للتطبيق. إذا كانت كمية القطرة كبيرة ، فسوف تلتصق الأنسجة عن غير قصد بالنافذة أو غطاء الزجاج.
12. ضع برفق غطاء دائري زجاجي مقاس 12 مم على هامش نافذة التصوير.
13. اسحب حلقة الخياطة لتلائم الأخدود الجانبي للنافذة واربطها ثلاث مرات.
14. قم بقص الحد الأقصى للموقع القريب من العقدة لمنع انقطاع الغرز الضيقة عندما تكون هذه الفئران مستيقظة.
15. دع الفئران تتعافى من التخدير (2-3 ساعات) وحقن الكيتوبروفين (5 مجم / كجم ، تحت الجلد في الجلد المترهل عند قاعدة الرقبة أو الورك للحيوان) لتخفيف الآلام. أعد تقييم علامات الألم كل 12 ساعة ويجب النظر في الكيتوبروفين كل 24 ساعة لمدة 1-3 أيام.
    ملاحظه: يؤثر التسكين على إفراز الأنسولين استجابة للجلوكوز. يجب أن يكون اختيار وتوقيت التسكين فرديا للغرض التجريبي.
16. استيعاب الماوس في القفص مع فراش كاف لتجنب ملامسة النافذة للقفص. تجنب إسكان المنزل بالفئران دون جراحة النافذة.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1. تصميم وتصوير نافذة التصوير داخل البنكرياس. (أ) عرض ثلاثي الأبعاد ومقطعي لنافذة التصوير داخل البنكرياس. (ب) الصورة الأمامية والخلفية لنافذة تصوير البنكرياس.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات غطاء نظارات دائرية مارينفيلد هاتف: 111520 غطاء زجاجي لنافذة تصوير البنكرياس مقص قزحية العين شركة JEUNGDO BIO & PLANT CO، LTD إس 1107-10 يمكن استبدال هذا المنتج بمنتج من شركة أخرى لوكتايت 401 هنكل 401 N- بوتيل cyanoacrylate الغراء حامل إبرة صغيرة شركة JEUNGDO BIO & PLANT CO، LTD H-1126-10 يمكن استبدال هذا المنتج بمنتج من شركة أخرى المقتطف الصغير شركة JEUNGDO BIO & PLANT CO، LTD 17004-03 يمكن استبدال هذا المنتج بمنتج من شركة أخرى الملقط الدقيق شركة JEUNGDO BIO & PLANT CO، LTD إف -1034 يمكن استبدال هذا المنتج بمنتج من شركة أخرى نايلون 4-0 أيلي ملحوظة434 خياطة غير قابلة للامتصاص أومنيكان ان 100 30 جرام بي براون FT9172220S بالنسبة لقسطرة الأوعية الدموية ، استخدم جزء الإبرة فقط نافذة تصوير البنكرياس Geumto Engineering طلب مخصص نافذة تصوير البنكرياس - ترتيب مخصص فيزيو سويت كينت العلمية PS-02 تحكم في درجة الحرارة المنزلية ملقط الحلقة شركة JEUNGDO BIO & PLANT CO، LTD إف -1090-3 يمكن استبدال هذا المنتج بمنتج من شركة أخرى رومبون باير رومبون عامل تخدير زوليتيل فيرباك زولتيل 100 عامل تخدير BALB / C عارية أورينت بيو BALB / C عارية BALB / C عارية