استخراج كأس الشبكية من الفأر: إجراء جراحي للحصول على كوب شبكية سليم من عين الفأر

الملخص

المصدر: Jiang، K. et al. تحديد تنفس الميتوكوندريا وتحلل السكر في عينات أنسجة الشبكية خارج الجسم الحي. J. Vis. إكسب (2021)

يصف هذا الفيديو بروتوكولا لعزل كوب الشبكية بدون طبقات التغطية الخارجية من مقلة عين الفأر. يمكن أن يساعد نسيج الشبكية المستخرج في دراسة المسارات الأيضية المختلفة التي تحدث في خلايا الشبكية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تشريح كوب الشبكية

1. القتل الرحيم للفأر عن طريق الاختناق بثاني أكسيد الكربون₂ باتباع المبادئ التوجيهية المؤسسية بشأن القتل الرحيم.
   ملاحظه: لا تترك في غرفة ثاني أكسيد الكربون₂ لفترة أطول من الوقت اللازم للقتل الرحيم.
2. قم بنزع العيون وضعها في مخزن مؤقت 1x PBS القديم في طبق بتري ثم ضعه تحت مجهر التشريح.
3. قم بإزالة عضلات المستقيم الإضافية المتصلة خارج مقلة العين بعناية ، عن طريق القطع باستخدام مقص دقيق وقطع العصب البصري.
4. استخدم إبرة 30 جم لعمل ثقب على حافة القرنية (ليمبوس) ؛ هذا بمثابة موقع إدخال للمقص الدقيق. بعد ذلك ، استخدم مقص تشريح دقيق لعمل قطع دائري على طول حافة القرنية ، وفصله عن كوب العين الخلفي.
5. استخدم ملقط تشريح حاد لإزالة القرنية والعدسة والخلط الزجاجي بعيدا عن كوب العين.
6. استخدم مقص تشريح دقيق لعمل عدة جروح صغيرة على الطبقة الصلبة عند حافة كوب العين. تجنب قطع طبقة الشبكية. استخدم ملقطين حادين للتشريح للتمسك بالأنسجة الصلبة على كل جانب من جوانب الجرح واسحب طبقة الصلبة بحذر شديد لإزالتها من الشبكية العصبية. كرر هذا حول كوب العين حتى تتم إزالة الصلبة بالكامل والحصول على كوب شبكية سليم.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 1X برنامج تلفزيوني ثيرمو فيشر 14190-144 إبرة قياس 30 BD الدقة الانزلاق 305106 أداة ثقب خزعة، 1 مم إنتيجرا ميلتكس 33-31 أ أ غرفة الاختناق CO2 ملقط تشريح دومون # 5 أدوات العلوم الدقيقة 11251-10 طرف مستقيم ملقط تشريح دومون # 7 أدوات العلوم الدقيقة 11274-20 طرف منحني مجهر تشريح ملقط Graefe أدوات العلوم الدقيقة 11051-10 طرف منحني مسنن مقص دقيق أدوات العلوم الدقيقة 15004-08 طرف منحني