تثبيت ضغط الصمام الرئوي المعزول للفأر: إجراء لعزل الصمام الرئوي للفأر وإصلاحه كيميائيا في شكل مغلق

الملخص

المصدر: Liu، Y.، et al. الجراحة ومعالجة العينات للتصوير المرتبط للصمام الرئوي الفئر. J. Vis. Exp. (2021)

في هذا الفيديو ، نصف إجراء عزل القيمة الرئوية للفأر وإصلاحها كيميائيا في التشكل المغلق عن طريق ضغط التروية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. استئصال الصمام الرئوي

1. الأوتوكلاف الأدوات اللازمة لتشريح الماوس. وهذا يشمل المقص الناعم ، والملقط الدقيق ، والمشابك الوعائية الدقيقة ، والملقط الذي يطبق المشبك ، وحاملات الإبر الدقيقة ، ومقص الزنبرك ، والمباعدات.
2. التأقلم مع جميع الفئران لمدة لا تقل عن أسبوعين قبل العملية. قم بإزالة الفئران C57BL / 6 ، التي يبلغ عمرها حوالي عام واحد ، من أقفاصها ووزنها ، ثم القتل الرحيم باستخدام كوكتيل الكيتامين / الزيلازين (3: 1 كيتامين: زيلازين ، 0.01 مل لكل جرام) جرعة زائدة.
3. ضع الفأر في وضع الاستلقاء الظهري على صينية وقم بتأمين أطرافه بشريط لاصق. بمجرد تأمينها ، قم بإجراء بضع الصدر.
   1. كشف القلب عن طريق إزالة أي أنسجة دهنية زائدة ولفافة.
   2. قم بإزالة الأذين الأيمن وقم بفتحه من خلال البطين الأيسر بمحلول ملحي بدرجة حرارة الغرفة (0.9٪ كلوريد الصوديوم). يجب أن يستغرق التروية حوالي 20 مل على مدى 30 ثانية. ينتج عن هذا إخراج الفأر.
4. قم بإزالة القلب بالكامل عن طريق قطع الوريد الأجوف العلوي والوريد الأجوف السفلي والشريان الرئوي والشريان الأورطي. يجب توخي الحذر بشكل خاص للشريان الرئوي. قطع حوالي 2 مم فوق التقاطع البطيني الشرياني ، حيث سيكون هذا بمثابة قناة للضغط.
5. قم بإزالة البطينين الأيمن والأيسر لتعريض الغرف للضغط الجوي. تأكد من أن بنية الجذع الرئوي يجب ألا تتأثر بإزالة البطينين.

فئة

2. تثبيت ضغط الصمام الرئوي

1. أنبوب ضغط Anastomose مع الشريان الرئوي ، تاركا مسافة حوالي 1 مم بين الوصلة الأنبوبية الصينية ونهاية الأنبوب لاستيعاب الحركات الكبيرة للوريقات والجذع الرئوي.
2. ارفع الخزان إلى ضغط فسيولوجي مماثل واملأه بالمحلول الملحي. اختبر نظام التدفق للتأكد من عدم وجود انسداد أو فقاعات هواء.
3. قم بتوصيل محبس بالصمام الرئوي المفاغرة وتأكد من التدفق الكافي عبر الأنبوب (أي عدم وجود فقاعات هواء) عن طريق تبديل مجرى التدفق. بمجرد أن يصبح التدفق كافيا ، قم بتحويل التدفق إلى الصمام الرئوي المفغر وتأكد من ضغط الجذع الرئوي. يتم تحديد ذلك عن طريق انتفاخ الجذع الرئوي.
4. بمجرد تأكيد ضغط الجذع الرئوي ، قم بدمج محلول التثبيت الأولي تدريجيا (1.25٪ جلوتارالديهايد ، 1.0٪ بارافورمالدهيد في 0.15 M cacodylate) حتى يتم تطهير المحلول الملحي. يتم ذلك عن طريق إزالة جزء ، حوالي 25٪ من سعة الخزان ، من المحلول الملحي واستبداله بالمثبت الأساسي.
   أنذر: المثبتات المستخدمة (بارافورمالديهايد والجلوتارالديهايد) شديدة السمية ويجب ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة (PPE) لضمان السلامة.
5. ضع شاشا مبللا بالمثبت فوق عينة الأنسجة لمنع الجفاف.
6. قم بنشر المثبت لمدة 3 ساعات ، وأعد ملء الخزان حسب الحاجة للحفاظ على ضغط ثابت. طوال فترة التثبيت ، ليس من غير المألوف أن يتقلص الصمام الرئوي بسبب التثبيت الكيميائي. إذا كان هذا هو الحال ، فقم بتجديد الخزان باستمرار بالمثبت الأولي للحفاظ على الضغط الفسيولوجي.
7. قم بتخزين صمام القلب في محلول التثبيت على حرارة 4 درجات مئوية حتى الاستخدام. تم تخزين العينات لمدة تصل إلى أسبوع واحد دون أي فرق ملحوظ.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 25٪ جلوتارالديهايد (AQ) EMS 16210 [ا] المكون المثبت الأساسي 0.9٪ حقن كلوريد الصوديوم شركة Hospira Inc. NDC 0409-4888-10 1 مل حقنة دينار بحريني 309659 حقنة 10 مل دينار بحريني 309604 إبرة 22 جرام دينار بحريني 305156 3-طريقة محبس سميث الطبية ASD، Inc MX5311L 4٪ بارافورمالدهيد (AQ) EMS 157-4-100 المكون المثبت الأساسي C57BL / 6 فئران مختبرات جاكسون 664 ب حوالي 1 يو المشبك تطبيق الملقط FST 00072-14 ملقط دومون # 5 FST 11251-20 ملقط دومون # 5/45 FST 11251-35 ملقط دومون # 7 ناعم FST 11274-20 مقص ناعم FST 14028-10 محلول ملحي (معقم 0.9٪ كلوريد الصوديوم) شركة هوسبيرا NDC 0409-0138-22 المجهر الجراحي لايكا M80 حامل إبرة تيش / ملقط مقرين MI1540 الانتهازي وال 9854-500 خياطة أحادية البولي أميد الأسود ، 10-0 شركة AROSurgical Instruments Corporation TI38402 خياطة أحادية البولي أميد الأسود ، 6-0 شركة AROSurgical Instruments Corporation SN-1956 حقن هيدروكلوريد الكيتامين شركة هوسبيرا NDC 0409-2053 حمض الأسبارتيك سيجما ألدريتش 56-84-8 مكون تلطيخ نترات الرصاص EMS 17900 مكون تلطيخ ثلاثي هيدرات الكاكوديلات الصوديوم سيجما ألدريتش 6131-99-3 مخزن مؤقت الأغاني غير المنسوجة شركة ماكيسون هاتف: 94442000 ملقط مايكرو أدسون FST 11018-12 فلتر Millex-GP ، 0.22 ميكرومتر ، PES 33 مم ، غير معقم EMD ميليبور SLGP033NS