نموذج الفأر القمي لحديثي الولادة: إجراء جراحي لبتر قمة البطين لدراسة إمكانات التجدد في قلب الفأر حديثي الولادة

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Li و Y. et al. زرع البلاعم القلبية للفئران حديثي الولادة في الفئران البالغة. J. Vis. Exp. (2021).

في هذا الفيديو ، نوضح إجراء إزالة قمة البطين الأيسر جراحيا لقلب الفأر حديثي الولادة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. عملية الاستئصال القمي في فأر Cx3cr1 ^{GFP / +} البالغ من العمر يوم واحد (خلفية C57BL / 6)

1. تخدير
   1. أخرج كل صغار الفأر من الأقفاص وضعها في صندوق نظيف وجاف.
   2. قم بتضمين كل فأر في الجليد لمدة 2-3 دقائق. تأكد من وجود حاجز رفيع مثل اللاتكس أو الشاش بين الجليد وجرو الفأر لمنع قضمة الصقيع.
   3. تحديد التخدير الكافي من خلال ملاحظة العلامات التالية: شحوب الجلد ، وقلة حركة الأطراف ، وقلة منعكس الدواسة.
2. بضع الصدر
   1. قم بتبريد منصة التشغيل البرونزية طوال الليل عند -20 درجة مئوية للمساعدة في الحفاظ على التخدير.
   2. أخرج الماوس المخدر من صندوق الثلج وضعه على منصة تشغيل برونزية. قم بتثبيت الماوس على منصة التشغيل في وضع ضعيف باستخدام شريط لاصق طبي.
   3. ضع منصة التشغيل مع الماوس عليها تحت مجسم
   4. قم بتطهير صندوق الفأر باستخدام وسادة تحضير مبللة بالبيتادين و 70٪ كحول أو بما يتفق مع السياسة المؤسسية.
   5. شق الجلد بقطع 1 سم في المنطقة الوربية الرابعة من تجويف الصدر ثم افصل العضلات الوربية باستخدام مقص الجراحة المجهرية حتى يتم الوصول إلى القلب.
   6. اضغط بالتناوب على الصدر والبطن بمساعدة ملقطين حتى يتم إخراج القلب من الصدر دون أي ضرر ميكانيكي.
   7. ضع الضلوع أسفل الشق الصغير وفوقه كتثبيت طبيعي لشل حركة القلب.
3. استئصال القمة البطينية
   1. حدد موقع قمة البطين الأيسر. قص قطر 1 مم من أنسجة قمة البطين باستخدام مقص استئصال القزحية تحت مجسم
   2. تأكد من تعرض حجرة البطين الأيسر وابدأ في النزيف.
   3. اضغط برفق على القلب مرة أخرى إلى تجويف الصدر باستخدام قطعة قطن.
   4. خياطة العضلات والأضلاع والجلد باستخدام 8-0 خيوط البرولين.
   5. نظف الماوس جيدا بعد العملية.
4. رعاية ما بعد العملية
   1. انقل الماوس من منصة التشغيل إلى بطانية تسخين 37 درجة مئوية لتدفئة الجسم مباشرة بعد العملية.
   2. تأكد من التباين لدى الفأر من خلال مراقبة العلامات التالية: استعادة التنفس التلقائي ، وتغيير لون البشرة من شاحب إلى وردي ، وحركة الأطراف.
   3. أعد الماوس الذي تم تشغيله إلى والدته بمجرد أن يتعافى.
   4. امزج الفأر الذي تم تشغيله بمواد تعشيش والدته إذا لزم الأمر.
      ملاحظه: من المهم إزالة جميع الجراء البالغة من العمر يوما واحدا من الأم مرة واحدة ثم إعادتها جميعا مرة واحدة بعد استعادة جميع الجراء.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مجموعة تفكك قلب حديثي الولادة Miltenyi Bio Tech ، Teterow ، ألمانيا < td class = "XL64" >130-098-373 < td class = "xl65">