نموذج الوذمة اللمفية في ذيل الفئران: تقنية in vivo لتوليد وذمة لمفية مستمرة في ذيل الفئران

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Hassanein ، A. H. et al. ، نموذج الوذمة اللمفية لذيل الفئر. J. Vis. Exp. (2021).

يصف هذا الفيديو تقنية في الجسم الحي لتوليد الوذمة اللمفية في ذيل الفئران ، وهو تراكم غير طبيعي للسوائل في مساحة الأنسجة الخلالية مما يؤدي إلى تورم في الذيل. يتم تطبيق النموذج لدراسة آليات وعلاج الوذمة اللمفية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

فئة

1. الاضطراب الجراحي للأمراض اللمفاوية لذيل الفأر

1. استخدم الفئران C57BL / 6 البالغة من العمر ثمانية أسابيع ذات التوزيع المتساوي بين الجنسين.
2. ضع فأرا تحت التخدير العام في غرفة الحث مع 3-4٪ إيزوفلوران في 100٪ أكسجين متبوعا بتخدير الصيانة بنسبة 1-3٪ أثناء العملية.
3. يتم تطبيق 0.5 ملغم/كغ بوبرينورفين تحت الجلد للسيطرة على الألم.
   ملاحظه: أدوية مسكنة إضافية تدار بعد العملية: كاربروفين مرة كل 24 ساعة لمدة 48 ساعة على الأقل وبوبيفاكائين مرة واحدة إما بعد إجراء الشق أو قبل إغلاق الشق ، يوضع بالتنقيط على حواف الجلد (يستمر حتى 4 - 6 ساعات).
4. ضع الماوس ظهريا وقم بإعداد الذيل بكحول الأيزوبروبيل بنسبة 70٪.
5. قم بقياس قطر الذيل قبل الإجراء بزيادات قدرها 5 مم بدءا من 20 مم من قاعدة الذيل باستخدام الفرجار. سيتم استخدام هذه القياسات لحساب الحجم باستخدام معادلة المخروط المقطوعة.
6. ضع علامة على استئصال محيطي 3 مم على الذيل على بعد 20 مم من القاعدة.
7. قم بإجراء استئصال دقيق للجلد بسماكة كاملة مقاس 3 مم بشفرة جراحية معقمة (مقاس 15) ، مع ترك جميع الأوعية الدموية الأساسية سليمة تحت التكبير المجهري الجراحي. شق العلامة المحيطية العلوية (20 مم من قاعدة الذيل) أولا من خلال الأدمة متبوعا بشق محيطي كامل السماكة 3 مم بعيدا عن الشق الأول
   1. قم بعمل شق رأسي عمودي كامل السماكة لتوصيل الشقين. استخدم بيك آب دقيق مسنن للإمساك بالحافة الأمامية واستخدم المقص الدقيق لتشريح عميق داخل المستوى اللاوعائي إلى الأدمة والسطحية إلى الوريد الأدني.
8. حقن 0.1 مل من الأيزوسلفان الأزرق (1٪) تحت الجلد قريب من طرف الذيل.
9. تحديد القناتين اللمفاويين المجاورتين لأوردة الذيل الجانبية تحت المجهر الجراحي. ستظهر الأدوية اللمفاوية باللون الأزرق بسبب حقن الأيزوسلفان. قم بتمرير الأوعية اللمفاوية باستخدام مقص جراحي مجهري مستقيم. استخدم المقص لتشريح مستوى بين الوريد الجانبي والوريد اللمفاوي بعناية. ثم مرر طرف شفرة مقصية واحدة بين الوعاء اللمفاوي والوريد الجانبي وأغلق الشفرات لعبور الوعاء اللمفاوي.
10. قم بتضميد جرح الذيل بضمادة شفافة معقمة ملتصقة. تحقق من شقوق ما بعد العملية يوميا للتأكد من أنها ليست مصابة أو نزفة وتوفير العناية بالجروح لمدة أسبوعين.
11. قم بإسكان منفردة لمنع أي إصابة أخرى في الذيل ولمنع من عض بعضها البعض ، مما قد يؤدي إلى مضاعفات جراحية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات المجهر الجراحي لايكا ، فيتزلار ، ألمانيا MSV266 ضمادة ملتصقة (Tegaderm) 3 م ، سانت بول ، مينيسوتا. 1626 واط C57BL / 6 فئران مختبرات جاكسون 664 ب ملقط Micro-Adson - أسنان 1x2 شركة أدوات العلوم الدقيقة (الولايات المتحدة الأمريكية) 11019-12 إبرة يمكن التخلص منها 30GX1 فيشر العلمية 305128 مقص التشغيل فيشر العلمية 12-460-796 إيزوسلفان بلو (ليمفازورين) 50 مجم / 5 مل مايلان هاتف: 67457-220-05