$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >1. جمع سرير الجرح للتحليل الجزيئي
- القتل الرحيم للفأر باستخدام اختناق ثاني أكسيد الكربون2 متبوعا بخلع عنق الرحم (أو تقنية مكافئة) في اليوم المحدد التالي للخزعة.
- احصد المنطقة البعيدة من القولون عن طريق فتح الجلد وعضلات البطن لكشف تجويف الجسم. ضع مقصا مغلقا تحت القولون وارفعه برفق لتحريره من المساريق الأساسي ثم اقطع القولون عند منتصف نقطة الوسط وعند فتحة الشرج لإزالته من الفأر.
- اغسل محتوى البراز باستخدام إبرة تزقيم الفئران متصلة بحقنة سعة 20 مل مملوءة ب 1x PBS المثلج ثم ضع القولون على ورق الترشيح.
- اقطع القولون طوليا على ورق الترشيح مع التأكد من أن الجانب المساريقي متجها لأسفل مقابل ورق الترشيح. ضع 0.2٪ من الميثيلين الأزرق على الغشاء المخاطي باستخدام ماصة ضغط بينما لا تزال الأنسجة على ورق الترشيح ثم قم بتصريف الميثيلين الأزرق الزائد. اعرض القولون تحت مجهر تشريح وحدد موقع فراش الجرح (الشكل 1 أ).
- باستخدام مقص قزحية صغيرة مقاس 4 بوصات ، قم بقص حافة فراش الجرح (الشكل 1 أ ، دائرة متقطعة) مع الحرص على عدم قطع طبقة العضلات (ما لم تكن العضلة مرغوبة) ونقل فراش الجرح المقطوع إلى أنبوب باستخدام ملاقط دقيقة للتجميد المفاجئ أو طريقة التخزين المرغوبة. < / >
ملاحظه: كمية الأنسجة التي تم جمعها بهذه الطريقة كافية لاستخراج الحمض النووي الريبي لتسلسل الحمض النووي الريبي أو تحليل ما يعادله.
