مقالة منهجية

توليد نموذج حلقة القولون القريب للفأر: إجراء جراحي لتوليد حلقة القولون القريبة وقياس نفاذية الأمعاء عن طريق الكشف عن علامات الفلورسنت في المصل بعد الحقن داخل اللمعة

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Boerner، K. et al. التقييم الوظيفي لنفاذية الأمعاء والهجرة عبر الظهارة للعدلات في الفئران باستخدام نموذج الحلقة المعوية الموحد. J. Vis. Exp. (2021).

في هذا الفيديو ، نصف إجراء جراحيا لتوليد حلقة القولون القريبة من الفأر أو مقطع pcLoop متبوعا بالحقن داخل اللمعة لعلامات الفلورسنت في الجزء لدراسة نفاذية الظهارة المعوية.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. توليد حلقة القولون القريبة (pcLoop)

  1. تحضير الجلد: افرك فرو خط الوسط البطني بمسحات كحولية أو إسفنجة شاش مبللة بنسبة 70٪ إيثانول. لا تبلل مساحة واسعة من الفراء بالكحول لمنع انخفاض حرارة الجسم.
  2. باستخدام المقص ، قم بإجراء بضع البطن في خط الوسط. قم بعمل شق عمودي في منتصف البطن (طوله حوالي 2 سم) وكشف الصفاق. احرص على عدم إصابة الأعضاء داخل البطن.
  3. ضع شاشا قطنيا مبللا مقطوعا مسبقا فوق التجويف المكشوف داخل البطن.
  4. استخدم مسحات قطنية مبللة لتعبئة القيكوم وإخراجه من الخارج. ضع القي بحذر على شاش القطن المبلل.
    ملاحظه: يتم توطين Caecum في الربع الذيلي الأيسر من تجويف البطن في غالبية الفئران بغض النظر عن جنس.
  5. باستخدام مسحات قطنية مبللة ، قم بإخراج الدقاق بالكامل وضعه فوق شاش قطني مبلل. تحديد القولون القريب وإمدادات الدم الموجودة في القولون المتوسط. قم بتعبئة القولون القريب وباستخدام ملقط رفيع ، قم بإنشاء الرباط الأول في منطقة خالية من الأوعية في القولون المتوسط على بعد حوالي 0.5 سم من الرأس (الشكل 1 ب).
  6. قم بقياس 2 سم من الرباط الأول وقم بإنشاء رباط ثان في منطقة خالية من إمدادات الدم في القولون المتوسط (الشكل 1 ج).
  7. باستخدام مقص ناعم ، قم بقص بعناية بجوار كل ربط لعزل pcLoop بطول 2 سم
    ملاحظه: مع مقص ناعم ، يتم قصه بعناية بجوار كل ربط لعزل الحلقة اللفائفية 4 سم ، مع الحفاظ على سلامة إمدادات الدم والغشاء المساريق.، من المهم قطع كلا الطرفين لعزل pcLoop الذي يتم تنظيفه بلطف من المحتويات اللمعية. قم بقطع أنسجة القولون والقولون المتوسط بعناية لمنع الأوعية الصغيرة من النزيف في تجويف الأمعاء. إذا لزم الأمر ، استخدم الكي الحراري للحد من النزيف في موقع الشق.
  8. اغسل pcLoop برفق باستخدام HBSS دافئ لإزالة البراز باستخدام أنبوب تغذية أصفر مرن متصل بحقنة 10 مل (قم بإعداد حقنة 10 مل مملوءة ب HBSS دافئ وقم بتوصيلها بأنبوب تغذية أصفر. سيتم استخدام هذه المحقنة لترطيب الأنسجة المكشوفة أثناء الجراحة).
  9. اربط طرفي القطع من pcLoop المتدفق باستخدام خياطة الحرير.
  10. استخدم حقنة سعة 1 مل بإبرة 30G لحقن 200 ميكرولتر من الكاشف ببطء مثل FITC-dextrans (1 مجم / مل في HBSS). حافظ على محلول FITC-dexterrn غير المستخدم محميا من الضوء لتحضير المنحنى القياسي بعد جمع المصل). سوف ينتفخ pcLoop مما يتسبب في انتفاخ معتدل في الغشاء المخاطي (الشكل 1D).
    ملاحظه: حقن الكاشف في تجويف pcLoop على الجانب الآخر من الشريان المساريقي. تأكد من الاتساق بين وقم بإنشاء حلقة pcLoop بطول 2 سم لضمان انتفاخ متساو للغشاء المخاطي.
  11. استخدم مسحات القطن المبللة لوضع الحلقة المربوطة والدقاق والقي برفق في تجويف البطن.
  12. استخدم حامل إبرة وملقط تشريحي و 3.0 خيوط حريرية غير قابلة للامتصاص بإبرة قطع عكسية لإغلاق جدار البطن.
  13. ضع في غرفة تخدير منظمة لدرجة الحرارة لفترة الحضانة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
الشكل 1: نموذج حلقة القولون القريب. (أ) نظرة عامة تخطيطية على نموذج pcLoop. يتم إجراء شق البطن المتوسط على الفئران تحت التخدير الموضوعة على لوح جراحة يتم التحكم في درجة حرارته. (ب) الخارج من القي (*) والقولون القريب والقولون المتوسط والدقاق. تم تحديد موقعين مناسبين للربط (1،2). (ج) يتم وضع الرباط الأول (1) بالقرب من القي ويتم وضع الرباط الثاني (2) عل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات المعدات والمواد مسحات الكحول BD دينار بحريني 326895 حقنة 1 مل درنة بدون إبرة دينار بحريني 309659 إبرة BD PrecisionGlide ، 25 جم × 5/8 بوصة دينار بحريني 305122 إبرة BD PrecisionGlide ، 30 جم × 1/2 بوصة دينار بحريني 305106 قضيب طرف قطني (قطعة قطن) ، 6 بوصات ، معقم فيشر ساينتفيك 25806 2WC Dynarex إسفنج شاش محشو بالقطن ، غير معقم ، 2 × 2 بوصة ميدكس 3249-1 مبخر التخدير EZ-7000 (النظام الكلاسيكي ، بما في ذلك وحدات التسخين) أنظمة EZ EZ-7000 كيموايب صغيرة (مناديل مناديل) فيشر ساينتفيك 06-666 موريا مقص فاين FST 14370-22 مرهم Puralube البيطري ، زيوت تشحيم العين المعقمة ديشرا 12920060 ملقط الحلقة (ملقط الأنسجة الحادة) FST 11103-09 روبوز جراحي 4-0 حرير أسود مضفر ، 100 ياردة فيشر ساينتفيك NC9452680 ملقط سيمكين (تشريحي
ملقط) FST 1108-13 Sofsilk غير قابل للامتصاص مطلي بخياطة سوداء مضفر من الحرير بحجم 3-0 ، 18 بوصة ، إبرة بطول 19 مم 3/8 قطع عكسي دائري هنري شاين إس إس 694 ملقط الطالب الناعم ، بزاوية FST 91110-10 10 مل حقنة PP / PE بدون إبرة ميليبور سيجما Z248029 الكواشف إيزوفلوران الهالوكربون هاتف: 12164-002-25 فلوريسين إيزوثيوسيانات ديكستران ، متوسط الوزن الجزيئي 4.000 سيغما 60842-46-8

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Mouse ModelMesocolon LigationSerum DetectionParacellular TransportEpithelial Barrier

مقالات ذات صلة