$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
فئة
1. زرع أقطاب EEG-ECG وربط أجهزة مراقبة الجهاز التنفسي
- أخرج أرنبا واحدا من حامل النقل وضعه في حضن محقق جالس.
- أمسك الأرنب عموديا واحتفظ به بالقرب من جسد المحقق.
- اخفض الأرنب إلى وضع ضعيف ، مع وضع رأس الأرنب على ركبتي المحقق ، ورأس الأرنب أقل من بقية جسمه. < / >
ملاحظه: تعمل هذه المناورة على إرخاء وتقليل احتمالية محاولته التحرك أو الهروب أثناء وضع الأقطاب الكهربائية.
- الآن بعد أن تم تأمين الأرنب في وضع ضعيف ، اطلب من محقق ثان نشر الفراء حتى يمكن التعرف على الجلد وعزله عن الأنسجة الأساسية.
- أدخل أقطاب كهربائية مثنية بزاوية 35 درجة تحت الجلد في كل إبط (الشكل 1 أ) .< / >
ملاحظه: يجب دفع الأقطاب الكهربائية بحيث يتم توصيلها بإحكام في الجلد ، ولكن لا تخترق الهياكل الأعمق. إن دخول القطب الكهربائي ثم الخروج منه (من خلال وعبره) يقلل من فرصة إزاحة الخيوط عند وضع الأرنب في المقيدة أو إذا تحرك أثناء التجربة (الشكل 1 ب). يتم تعقيم جميع الأقطاب الكهربائية بنسبة 70٪ من الإيثانول قبل وضعها.
- ضع الخيوط على الصدر الخلفي إلى الأطراف الأمامية اليمنى واليسرى وعلى البطن الأمامي الأمامي للطرف الخلفي الأيسر. ضع قطب كهربائي أرضي أمام الطرف الخلفي الأيمن على البطن (الشكل 2 أ).
- بمجرد وضع جميع أسلاك تخطيط القلب بشكل صحيح ، أعد الأرنب إلى وضع الانبطاح ، مع تشغيل الخيوط على جانب واحد من بطن الأرنب ، وانقل الأرنب إلى مصفاة بحجم مناسب (على سبيل المثال ، 6 × 18 × 6 بوصة). عند وضع الأرنب في المصفاة ، اسحب السلك السائب لأعلى لتقليل الأرنب من سحب الأقطاب الكهربائية بساقيه. ألصق الأسلاك على جانب التقييد حتى لا تعلق تحت الأرنب أثناء التجربة (الشكل 2 ب).
- قم بتأمين الأرنب في المقيدة عن طريق خفض التقييد حول الرقبة وقفله في مكانه. بالإضافة إلى ذلك ، حرك الأطراف الخلفية لأعلى أسفل وقم بتأمين التقييد الخلفي.
ملاحظه: يجب أن يكون المرء قادرا على وضع 1-2 إصبع داخل الفراغ الموجود أسفل الرقبة للتأكد من أنه ليس ضيقا جدا. خاصة أثناء التجارب التي قد تكون هناك حركة حركية ، من المهم تشديد ضبط النفس لتقليل الحركة ، وإصابات العمود الفقري المحتملة ، وخلع الأطراف ، والقدرة على طرد التقييد الخلفي (الشكل 2 ب). تم الحفاظ على الأرانب في المقيدة لمدة ~ 5 ساعات دون أي مشاكل تتعلق بزيادة الحركة أو علامات الجفاف.
- بالنسبة للأرانب الصغيرة (على سبيل المثال ، أقل من شهرين) ضع وسادة معززة مطاطية أسفل لرفع الأرنب لأعلى ، مما يمنع الأرنب من إراحة رقبته في الجزء السفلي من مسند الرأس (الشكل 2C).
ملاحظه: قد يكون الانخفاض المفاجئ في معدل ضربات الجهاز التنفسي والقلب ثانويا لاصطدام الرقبة. إذا حدث هذا ، فقم بفك مصفاة الرقبة وارفع رأس الأرنب لتخفيف أي ضغط على الرقبة.
- عندما لا يتتبع التقييد الخلفي عن كثب ظهر / العمود الفقري للأرنب ، ضع فاصلا PVC لمنع أي حركة يمكن أن تسبب إصابات في العمود الفقر><ي.
ملاحظه: على سبيل المثال ، يمكن وضع أنبوب PVC بطول ~ 14 سم × 4 بوصة بقطر داخلي ، مع إزالة أقل من 25-33٪ فوق الأرنب بالرغوة لتوفير ضبط النفس المناسب (الشكل 2 ج).
- الآن بعد أن تم وضع الأرنب بإحكام في المقيدة ، أدخل أقطاب الدبوس المستقيمة تحت الجلد مقاس 7-13 مم في فروة الرأس (الشكل 1 أ). باستخدام نهج زاوية 45 درجة للدخول ، قم بتشغيل الأسلاك بين الأذنين ، وقم بربط الأسلاك بشكل فضفاض بالمقيدة خلف الرأس للحفاظ على وضع الرصاص. ضع 5 يؤدي مخطط كهربية الدماغ في المواضع التالية: الأمامي الأيمن ، الأمامي الأيسر ، القذالي الأيمن ، القذالي الأيسر ، الرصاصي الأيسر ، والرصاص المرجعي المركزي (Cz) عند النقطة بين الخيوط الأربعة الأخرى (الشكل 2D).
ملاحظه: يتم وضع الأقطاب الكهربائية بشكل صحيح عند وضعها في أنسجة تحت الجلد مقابل الجمجمة. يقلل هذا الموضع من القطع الأثرية من الأنف والأذنين والعضلات المحيطة الأخرى. لا مفر من بعض القطع الأثرية من حركة الأنف الإيقاعية. يجب وضع خيوط مخطط كهربية الدماغ الأمامية وسطيا لعيون الأرنب وتشير إلى الأمام. يجب وضع الخيوط القذالية أمام الأذنين وستشير إلى الاتجاه الإنسي. يتم وضع Cz في وسط الجزء العلوي من الرأس عند نقطة تقع بين جميع الأقطاب الكهربائية الأربعة (في منتصف الطريق بين Lambda و Bregma ، على طول خط الخياطة). يشير دبوس قطب تشيكوسلوفاكيا إلى الأمام.
- مرر أسلاك مخطط كهربية الدماغ بين الأذنين ، لتجنب محاولة الأرنب لدغة الأسلاك.
- قم بتوصيل مقياس التأكسج النبضي بتحجم التأكسج النبضي بأذن الأرنب فوق وريد الأذن الهامشي.
ملاحظه: قد يكون من الضروري حلق الشعر الزائد من الأذن لتحسين الإشارة أو استخدام بعض الشاش للحفاظ على المستشعر في مكانه.
- تأكد من أن معدل ضربات القلب في تخطيط التحجم يرتبط بمعدل ضربات القلب من مخطط كهربية القلب وأن تشبع الأكسجين معروض (الشكل 3 ج).
- ضع قناع الوجه برفق مع أنبوب تصوير الرأس فوق فم الأرنب وأنفه (الشكل 2H). قم بتأمين قناع الوجه بخيط ملفوف حول القناع وقم بتوصيل طرفي الخيط بالمقيدة. قم بتوصيل الطرف الآخر من أنبوب capnography بجهاز مراقبة العلامات الحيوية.
ملاحظه: من المهم منع الخيط من وضع عيون الأرنب أثناء التجربة. للقيام بذلك ، قم بلصق الخيط في منتصف التقييد بين آذان الأرنب. من أجل تحسين إشارة capnography ، قم بإنشاء صمام أحادي الاتجاه باستخدام شريط وقطعة رقيقة من النتريل تسمح للأكسجين بالدخول إلى قطعة T ، وسوف توجه الزفير CO2 إلى أنبوب capnography (الشكل 2I).
2. تسجيل الفيديو - EEG - ECG
- قم بإجراء تسجيل فيديو EEG-ECG باستخدام برنامج EEG المتاح تجاريا.
ملاحظه: يتم قفل الخيوط الحيوية والفيديو لربط الإشارات الكهربائية وإشارات الفيديو لاحقا (على سبيل المثال ، ارتفاع مخطط كهربية الدماغ مع رعشة رمع عضلي).
- تأكد من الاتصال الأمثل ، مع عدم وجود انحراف أساسي ، وعدم وجود ضوضاء كهربائية 60 هرتز ، ونسبة إشارة إلى ضوضاء عالية. على وجه التحديد ، تأكد من أنه يمكن تصور كل مرحلة من مراحل شكل الموجة القلبية على مخطط كهربية القلب وأن موجات دلتا وثيتا وألفا ليست محجوبة بصريا بواسطة ضوضاء عالية التردد على مخطط كهربية الدماغ.
- إذا كانت جميع الأقطاب الكهربائية تنتج كميات زائدة من الضوضاء ، فاضبط السلك المرجعي المركزي. إذا كان قطب كهربائي واحد فقط صاخبا بشكل مفرط ، فقم بدفع هذا القطب الكهربائي بشكل أعمق في الجلد أو أعد وضعه حتى لا يتعرض المعدن.
- اضبط الفيديو بحيث يمكن رؤية جميع الأرانب في وقت واحد ، مما يسمح بارتباط النشاط الحركي بنتائج مخطط كهربية الدماغ (الشكل 3 أ).
ملاحظه: يستوعب النظام تسجيلات مخطط كهربية الدماغ / تخطيط القلب / قياس التأكسج / تصوير الكابنوغرافيا في وقت واحد من ما يصل إلى 7 أرانب.
- ابدأ التسجيل الأساسي من كل لمدة لا تقل عن 10-20 دقيقة أو حتى يستقر معدل ضربات القلب إلى حالة الاسترخاء الهدوء (200-250 نبضة في الدقيقة) ولا تظهر الأرانب حركات كبيرة لمدة 5 دقائق على الأقل. احصل على بيانات كهربية النطاق الترددي الكامل دون أي مرشحات. من أجل تصور البيانات بشكل أفضل ، اضبط مرشح التردد المنخفض (= مرشح التمرير العالي) عند 1 هرتز ومرشح التردد العالي (= مرشح التمرير المنخفض) عند 59 هرتز
ملاحظه: علامة أخرى على استرخاء الأرنب هي بداية مغازل نوم مخطط كهربية الدماغ (تمت مناقشتها لاحقا).
- أضف ملاحظات مقفلة زمنيا أثناء التجربة في الوقت الفعلي للإشارة إلى توقيت التدخلات (على سبيل المثال ، توصيل الدواء) والأحداث العصبية القلبية (على سبيل المثال ، ارتفاع مخطط كهربية الدماغ ، والنوبات الحركية ، والنبضات خارج الرحم ، وعدم انتظام ضربات القلب) ، والقطع الأثرية الحركية / المحققة.
ملاحظه: نظرا للتكرار الذي يحتاجه المحقق لتطبيق التدخل (على سبيل المثال ، التحفيز الضوئي ، توصيل المخدرات) ، لتقليل ضغط المحقق الذي يدخل ويخرج من الغرفة ويفتح / يغلق الباب ، يظل المحقق على الجانب الآخر من الغرفة طوال التجربة. يجلس المحقق بعيدا عن قدر الإمكان ، ويظل ساكنا وهادئا لتقليل إزعاج المحتملة.
