عزل زر القرنية: إجراء جراحي للحصول على زر القرنية من عين الخنازير

الملخص

المصدر: Okurowska ، K. ، et al. إنشاء نموذج قرنية الخنازير خارج الجسم الحي لدراسة العلاجات الدوائية ضد التهاب القرنية الجرثومي. J. Vis. Exp. (2020).

في هذا الفيديو ، نعرض إجراء لعزل الزر القرنيية جراحيا لإنشاء نموذج قرنية الخنازير خارج الجسم الحي. النموذج مفيد للدراسات النسيجية والمرضية والدوائية نظرا لتشابهه مع العين البشرية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. التعقيم

1. الخطوة الحرجة: قم بتطهير جميع الملقط والمقص عن طريق النقع لمدة ساعة واحدة في محلول 5٪ (حجم حجم / حجم) من Distel في الماء المقطر ، وتنظيفه بفرشاة ، وشطفه بماء الصنبور وتعقيمه في فرن على حرارة 185 درجة مئوية لمدة 2 ساعة على الأقل.
قم
2. بتعقيم جميع الأواني الزجاجية والكواشف الأخرى عن طريق التعقيم عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة أو قم بإعداد الكواشف وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. قم بتنفيذ الإجراءات التالية في خزانة أمان علم الأحياء الدقيقة من الدرجة الثانية.

< p class = "jove_title" >2. جمع العينات

1. مجموعة من عيون الخنازير
   1. يزرع سلالة بيضاء كبيرة ، تم استخدام صليب مع خنزير هامبشاير. صدمت بتيار كهربائي وتم نزع العينين بعد ساعتين في المسلخ.
   2. الخطوة الحرجة: بمجرد نزع الولادة ، انقل العينين إلى المختبر في محلول ملحي معقم بالفوسفات (PBS) لمنعهما من الجفاف ومعالجتهما فور وصولهما.

< p class = "jove_title" >3. تحضير زر الصلبة القرنية

1. استخدم ملقطا معقما لتثبيت الأنسجة المحيطة بمقلة العين ونقلها إلى طبق بتري. قم بإزالة الملتحمة والأنسجة العضلية حول مقلة العين على طبق بتري باستخدام شفرة المشرط رقم 15 والملقط.
2. ارفع مقلة العين برفق أثناء إمساك العصب البصري بالملقط وانقله إلى وعاء سعة 0.5 لتر مملوء ب PBS المعقم.
3. بمجرد تنظيف جميع العيون من الأنسجة المحيطة ، انقلها باستخدام ملقط معقم إلى وعاء آخر سعة 0.5 لتر مملوء باليود بوفيدون بنسبة 3٪ (v / v) في PBS واتركه لمدة 1 دقيقة.
4. انقل مقل العيون إلى وعاء آخر سعة 0.5 لتر مع PBS معقم.
5. استخدم الملقط لإبقاء العين ثابتة على طبق بتري وقم بعمل قطع بالقرب من القرنية بشفرة مشرط رقم 10A.
6. الخطوة الحرجة: أمسك حافة الجرح واستخدم المقص لاستئصال القرنية تاركا حوالي 3 مم من الصلبة المحيطة بالقرنية. تأكد من أن الطرف الحاد للمقص لا يخترق القزحية أو الأنسجة المشيمية وأنه في الفضاء فوق المشيمية.
7. امسك زر الصلبة القرنية بالملقط واستخدم زوجا آخر من الملقط النهائي المدبب لفصل الأنسجة العنبية برفق.
8. ارفع زر الصلبة القرنية من الكرة الأرضية المتبقية واشطفه لفترة وجيزة في محلول اليود بوفيدون بنسبة 1.5٪ (v / v) في PBS في طبق 12 بئر.
9. ضع زر الصلبة القرنية في 12 لوحة أخرى مملوءة ب PBS المعقمة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات سيلستار 12 لوحة بئر غرينر بيو ون 665180 ديستيل فيشر ساينتيك 12899357 ملقط فيشر ساينتيك 15307805 برنامج تلفزيوني SLS ص 4417 طبق بتري فيشر ساينتيك 12664785 بوفيدون اليود صيدلية ويلدريكس 2122828 شفرة المشرط رقم 15 فيشر ساينتيك [أو305] مشرط سوان مورتون فيشر ساينتيك 11849002