استخراج أنسجة القصبات الهوائية للخنازير: إجراء لتشريح أقسام أنسجة الشعب الهوائية من رئتي الخنازير

الملخص

المصدر: Harrington، N. E. et al. اختبار فعالية المضادات الحيوية في نموذج خارج الجسم الحي للزائفة الزنجارية والمكورات العنقودية الذهبية في رئة التليف الكيسي.

في هذا الفيديو ، نصف إجراء جراحيا لاستخراج أنسجة الشعب الهوائية من رئة الخنازير المحصودة. يمكن استخدام أنسجة القصبات الهوائية خارج الجسم الحي لتطوير نماذج العدوى لدراسة التهابات الرئة المزمنة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

فئة

1. تشريح أنسجة رئة الخنازير خارج الجسم الحي (EVPL)

1. الحصول على الرئتين من المصدر المحدد في أسرع وقت ممكن بعد الذبح ، مع التأكد من بقائها باردة عن طريق نقلها إلى المختبر في صندوق تبريد منزلي.
   ملاحظه: تظهر الرئتان القريبتان من يوم الذبح كدمات أقل من التخزين ، ولكن يمكن أيضا استخدام الأنسجة المحفوظة في التخزين البارد لمدة تصل إلى 4 أيام من الذبح. نظرا لأنه يجب نقل صندوق التبريد إلى محل الجزارة أو المسلخ ، فيجب تطهيره وفقا لإرشادات المختبر المحلي بعد كل استخدام وتخزينه خارج مختبر الأحياء الدقيقة عندما لا يكون قيد الاستخدام ، لتقليل مخاطر التلوث وخرق الاحتواء.
2. العمل على سطح معقم وتحت اللهب ، ضع الرئتين على لوح تقطيع بلاستيكي نظيف مغطى بورق الألمنيوم المعقم. تأكد من بقاء القصيبات سليمة. إذا كان هناك أي ضرر في المسلخ أو أثناء النقل ، فإن الرئتين غير مناسبة للاستخدام.
3. قم بتسخين سكين لوح الألوان تحت اللهب ولمس السكين لفترة وجيزة جدا في منطقة الرئة المحيطة بالقصيبات لتعقيم سطح الأنسجة.
4. اقطع الأنسجة السطحية المحيطة بالقصيبات الهوائية باستخدام شفرة حلاقة معقمة. قم بعمل شقوق موازية للقصيبات الهوائية لمنع أي ضرر.
5. بمجرد تعرض القصيبات ، قم بعمل شق مقطعي عبر القصيبات الهوائية في أعلى نقطة مرئية لتحرير القصيبات.
6. باستخدام ملقط معقم ، أمسك الطرف الحر للقصيبات برفق وقم بقطع أي أنسجة غير مرغوب فيها متبقية باستخدام شفرة حلاقة معقمة. قم بعمل شق مقطعي نهائي عبر القصيبات قبل ظهور أي تفرع لإزالة القصيبات من الرئتين.
7. ضع القصيبات في أول غسول DMEM / RPMI 1640. اترك القصيبات في الغسيل وكرر الخطوات 1.2-1.5 لحصاد أقسام إضافية من القصيبات الهوائية من نفس الرئة كما هو مطلوب للحصول على أقسام كافية من الأنسجة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 70٪ إيثانول أو ما شابه ذلك لمعدات تشريح تعقيم السطح والفلامين GOF رقائق الألومنيوم - معقمة مسبقا عن طريق التعقيم - لتغطية لوح التقطيع الذي ستقوم بتشريح الرئتين عليه موقد بنسن لوح التقطيع - نوصي باستخدام لوح بلاستيكي للسماح بإزالة التلوث بسهولة بالكحول. Coolbox لنقل الرئتين إلى المختبر مقص تشريح بأحجام مختلفة وسط النسر المعدل من Dulbecco (DMEM) فيشربراند 2 مل أنابيب مقواة ثيرمو فيشر 15545809 سكين البليت الكبير شفرات الحلاقة المثبتة لوح تقطيع بلاستيكي ورقائق ألومنيوم لإنشاء سطح تشريح معقم وقابل للتنظيف معهد روزويل بارك التذكاري (RPMI) 1640 متوسط اختيار الملقط (يوصى بأطراف حادة) حاويات مناسبة للتخلص من الأدوات الحادة الملوثة وأنسجة روضة الخنازير، وفقا لسياسات الصحة والسلامة الخاصة بمؤسستك.