$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >1. تشريح الأنسجة
- تحضير أنسجة الخنازير باستخدام مساحة عمل تشريح غير معقمة.
- احصل على عيون الخنازير منزوعة الأشجار من مسلخ محلي أو دراسات حيوانية أو بائع. حافظ على العينين على الجليد المغمور في PBS أثناء التسليم واستخدمه فور الاستلام.
- اقطع الأنسجة خارج الحجاج وقم بقص الملتحمة ولم يتبق سوى القشرة القرنية والعصب البصري. قم بإجراء التشريح في ظل ظروف غير معقمة باستخدام مقص جراحي كبير وملقط في حزمة أداة تشريح إجمالية.
- ضع العينين مرة أخرى في PBS الطازج على الجليد حتى يتم تشريح جميع العيون المطلوبة للإعداد التجريبي بشكل أولي / إجمالي.
- اغمر العينين في محلول بيتادين بنسبة 10٪ لمدة دقيقتين في حاويات مغلقة وانقلها بشكل معقم إلى خزانة BSC II للتشريح الدقيق (الخزانة # 1). قم بتنفيذ جميع الأعمال اللاحقة في ظل ظروف معقمة لتقليل التلوث أثناء الإعداد.
- تشريح الأجزاء الأمامية معقمة.
- بعد دقيقتين في محلول البيتادين ، انقل العينين إلى ثلاث غسلات متسلسلة من 1x Antibiotic-Anticotic-PBS (AA-PBS) المعقم لإزالة محلول البيتادين الزائد من سطح العين مع الحفاظ على عقم أنسجة العين. بعد ثلاث غسلات ، حافظ على الأنسجة في AA-PBS حتى الاستخدام الآخر.
قم - بتقطيع العين باستخدام شفرة حلاقة / مشرط ومقص منحني. ضع العين على شاش مبلل ب AA-PBS وقم بعمل شق بشفرة حلاقة معقمة أو مشرط بالقرب من خط الاستواء للعين (60/40 مقسمة مع 40 على الجانب الأمامي). باستخدام مقص جراحي منحني ، قم بتقطيع العين إلى نصف لعزل العين الأمامية (نصف القرنية).
ملاحظه: يجب أن يكون القطع حول الجزء الأمامي مستمرا لمنع الحواف الخشنة والخشنة في الصلبة التي ستؤدي إلى تسرب السوائل بعد الإعداد في ثقافة الأعضاء.
- استخدم المقص الدقيق كمجرفة لاستخراج الفكاهة الزجاجية من الجزء الأمامي. قم بإزالة العدسة من الجزء الأمامي باستخدام مقص دقيق. اترك الأجزاء الأمامية في AA-PBS حتى خطوات تشريح أخرى.
ملاحظه: يمكن الاحتفاظ بجميع العيون التي سيتم تشريحها في هذه الخطوة وأخذها واحدة تلو الأخرى خلال ما تبقى من عملية التشريح.
- باستخدام مجهر تشريح ، قم بقص القزحية إلى جذر القزحية تدريجيا ، شعاعيا حتى تظهر الشبكة التربيقية (TM). TM هو نسيج مصطبغ يتكون من ألياف موجهة محيطيا حول القشرة القرنية. ستؤدي القطع الدقيقة في القزحية باتجاه جذر القزحية إلى كشف عمق TM تحت الأنسجة.
- قص 360 درجة حول القزحية بنفس عمق القطع الأولي في الأنسجة لفضح منطقة TM بأكملها. قم بتنظيف أي قزحية متبقية تغطي TM حسب الضرورة.
- قم بقص بقايا الجسم الهدبي خلف TM ، تاركا فقط شريطا رفيعا من الأنسجة الخلفية لمنطقة TM (حوالي 1 مم).
- ضع الجزء الأمامي المفصل (AS) في الوسائط حتى مزيد من الإعداد في ثقافة الأعضاء الأمامية (ASOC) في مجموعة الأطباق BSC II خزانة (الخزانة # 2).
ملاحظه: يمكن وضع جميع العيون في هذه المرحلة قبل إعداد ASOC إذا كان مستخدم واحد يقوم بتشريح وتجميع طبق ثقافة الأعضاء.