إجراء الحقن في الجزء الجني من الغدة الدمعية العلوية: تقنية لإحداث مرض جفاف العين في نموذج الأرانب

الملخص

المصدر: Honkanen ، R. A. ، et al. نموذج أرنب لمرض جفاف العين الناجم عن نقص الماء الناجم عن حقن Concanavalin A في الغدد الدمعية: تطبيق على دراسات فعالية الأدوية. J. Vis. Exp. (2020).

في هذا الفيديو ، نعرض إجراء للحث على مرض جفاف العين المائي في نموذج الأرانب عن طريق حقن الجزء الجني من الغدة الدمعية العلوية مع Concanavalin A. هذا النموذج مفيد في فحوصات الحرائك الدوائية والتوزيع الحيوي للأدوية لعلاج مرض جفاف العين.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. والسكن

1. الحصول على أرانب نيوزيلندا بيضاء (NZW) تزن 2-3 كجم.
2. ضع الأرانب منفردة في أقفاص ذات درجة حرارة صارمة (65 ± 5 درجة فهرنهايت) ورطوبة (45 ± 5٪). يجب أن يكون للإضاءة دورة تشغيل / إيقاف 12 ساعة.
3. توفير وصول غير محدود إلى الماء وحساء الأرانب القياسي. تخلص من الإثراء الغذائي لأنها قد تحتوي على فيتامين أ الذي يؤثر على العين.
4. التأقلم مع لمدة أسبوعين على الأقل قبل التدابير الأساسية أو تحريض جفاف العين.

< p class = "jove_title" >2. طرق التخدير والقتل الرحيم

ملاحظة: تتطلب جميع الإجراءات تخديرا خفيفا باستثناء حقن Con A الذي يتطلب تخديرا معتدلا.

1. للتخدير الخفيف ، قم بحقن الأسيبرومازين (1 مجم / كجم) تحت الجلد على الكتفين باستخدام إبرة قياس 26. نقطة النهاية للتخدير الخفيف: تحافظ على وضع رأس مريح مع عدم وجود شحمة الأذن منتصبة تماما.
   ملاحظه: إذا لم يتم الوصول إلى نقطة النهاية المناسبة ، فقد يتم إعطاء حقنة إضافية من الأسيبرومازين. يجب أن تظل دائما مستيقظة ، وتستجيب للمس شعيراتها ، ولا تظهر أبدا تباطؤا في التنفس.
2. للتخدير المعتدل ، أعط أولا أسيبرومازين على النحو الوارد أعلاه. بعد الوصول إلى نقطة النهاية (انظر الملاحظة أعلاه) ، أعط الأيزوفلوران باستخدام قناع غاز مع ضبط تدفق O₂ عند 1 لتر / دقيقة وضبط توصيل الأيزوفلوران على 5٪ (الشكل 1).
3. قم بإدارة الأيزوفلوران حتى ترتاح نغمة جسم الأرنب تماما وتصبح الأذنين مرنة تماما.
   ملاحظه: يجب ألا تحدث أي حركات عضلية تعويضية عندما يتم قلب على جانبه ؛ يظل التنفس دائما عفويا.
4. يحدث الشفاء التلقائي في غضون 2-5 دقائق: تشمل العلامات حركات الرأس التلقائية وزيادة أو طبيعية العضلات بعد اكتمال الإجراء التجريبي بالتخدير المعتدل ، راقب الأرانب لمدة 30 دقيقة أو حتى يعود سلوكها إلى طبيعته.
   ملاحظه: مرهم العيون غير مطلوب أثناء أي شكل من أشكال التخدير. 1) في التخدير الخفيف ، لا تزال في حالة تأهب وتحافظ على رد فعل وميض. في التخدير المعتدل ، يكون تثبيط منعكس الوميض قصيرا جدا بحيث لا يكون سطح العين في خطر. 2) وضع مرهم العين على سطح العين يمنع تصور الهياكل التي تم تقييمها أثناء الاختبار.
5. القتل الرحيم: استخدام جرعة زائدة من البنتوباربيتال الوريدي (100 ملغ/كغ).

< ص الفئة = "jove_title">3. تحريض وعلاج جفاف العين

< p class = "jove_content" >ملاحظة: يتم حقن ثلاثة أجزاء من نظام الغدة الدمعية المدارية.

1. تخدير الأرانب مع أسيبرومازين 0.2 مجم / كجم تحت الجلد.
2. قص الفراء في المنطقة المحيطة بالحجاج وفروة الرأس وإزالة أي فرو متبقي تماما باستخدام Nair. اترك البشرة ناعمة تماما للحصول على تصور أفضل للسمات المميزة التشريحية والحقن الموجه بالولايات المتحدة من كونكانافالين أ (الشكل 2).
3. تحفيز التخدير المعتدل كما هو موضح أعلاه.
4. حقن الجزء الجني من الغدة الدمعية العلوية (PSLG)
   ملاحظه: قم بإجراء حقن PSLG أولا.
   1. يوضع على العين المناسبة 25 ميكرولتر من الليدوكائين الخالي من المواد الحافظة 1٪ باستخدام ماصة دقيقة.
   قم
   2. بتحريك الجفن العلوي وقم بالضغط الإنسي اللطيف على الحافة المدارية الخلفية حتى يظهر النتوء الذي يشير إلى الجزء الجني من الغدة. يظهر PSLG كارتفاع منتفخ صغير في الجزء الخلفي (الصدغي) من الجفن العلوي.
      ملاحظه: لعرض أنسجة الغدة أثناء عملية التعلم ، ضع 5٪ فلوريسين على المنطقة (الشكل 3 أ). يمكن رؤية الدموع تتدفق من PSLG المنتفخة. لا حاجة إلى تطبيق الفلورسين لإدارة Con A. يتم ذلك فقط لأغراض التوضيح لإظهار أنسجة الغدة.
   3. باستخدام ملقط ذو أسنان دقيقة وإبرة قياس 27 على حقنة السل ، اخترق الغدة مباشرة باستخدام نهج عبر الملتحمة. تقدم الإبرة 2 مم في الأنسجة وحقن 500 ميكروغرام من Con A بحجم 0.1 مل (الشكل 3 ب) .
      ملاحظة: يمكن أن تكون هذه الحقنة مؤلمة في بعض الأحيان. إذا لزم الأمر ، احتفظ بالحيوانات تحت الأيزوفلوران حتى يكتمل هذا الحقن.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: تخدير قناع الغاز. تظهر هذه الصورة قناع الغاز الذي يوفر تخديرا معتدلا قصيرا مع الأيزوفلوران.

الشكل 2: تحضير الأرانب لحقن كونكانافالين أ. (أ) تستخدم المقصات الصغيرة لإزالة الفراء ، مما يسمح بتصور أسهل للمعالم لتحديد ا...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 27 إبر قياس (5/8) بيكتون ديكنسون وشركاه ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي 305921 إبر لحقن ConA في الغدد الدمعية أسيبروينج (أسيبرومازين) هنري شاين لصحة ، دبلن ، أوهايو NDC11695-0079-8 0.1 مل / كجم الحقن تحت الجلد لتخدير الأرانب مبخر التخدير VetEquip ، بليسانتون ، كاليفورنيا البند #911103 الأسقف هارمون ملقط بوش ولومب (شتورز) ، بريدجووتر ، نيوجيرسي E1500-C ملقط الأنسجة كونكانافالين أ سيجما ، سانت لويس ، ميزوري سي 2010 صنع 5 ملغ / مل في PBS للحقن في الغدد الدمعية للأرانب الفلورسينات أكرون ، ليك فورست ، إلينوي NDC17478-253 خفف إلى 0.2٪ باستخدام PBS لقياس TBUT إيزوفلوران هنري شاين ، ميلفيل ، نيويورك هاتف 29405 ليدوكائين سيجما ، سانت لويس ، ميزوري L5647 1٪ في PBS لعامل التخدير PBS (محلول ملحي مخزن بالفوسفات) ميدياتك ، شركة ماناساس ، فيرجينيا 21-031-السيرة الذاتية أرنب ، نيوزيلندا أبيض أو هولندي بحزام (كما هو موضح في النص) مختبرات نهر تشارلز ، والثام ، ماساتشوستس 2-3 كجم البحث عن العدسات الجراحية +1.50 تصاميم للرؤية ، بوهيميا ، نيويورك عنصر التخصص توفير روعة سطح العين مع مراقبة تفكك المسيل للدموع وإجراء حقن Concanavalin A.