توليد نموذج سرطان كبد الأرانب: إجراء جراحي لزرع أنسجة الورم في الفص الأيسر من الكبد لتحريض سرطان الخلايا الكبدية

الملخص

المصدر: Khabbaz، R. C. et al. التطوير والاستخدام الوعائي لنموذج Rabbit VX2 لسرطان الكبد. J. Vis. Exp. (2019)

في هذا الفيديو ، نوضح الزرع الجراحي لأنسجة الورم في كبد الأرانب للحث على سرطان الخلايا الكبدية. يساعد الإجراء في إنشاء نموذج حيواني موثوق به لدراسة سلوك الورم وتطوير العلاجات الموضعية التي تستهدف سرطانات الكبد.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< ص الفئة = "jove_title" >1. زرع ورم الكبد عن طريق شق البطن

1. تحضير الأرنب المتلقي لبضع البطن. تخدير الأرنب المتلقي باستخدام 45 ملغم/كغ من الكيتامين و5 ملغ/كغ زيلازين للتحريض متبوعا بالتنبيب والصيانة ب 1٪-3٪ من الأيزوفلوران حسب الحاجة. عندما يتم تخدير الأرنب ، احلق موقع الجراحة باستخدام ماكينة قص الشعر. نظف منطقة الشق باستخدام غسل ثلاث مرات بمقشر البيتادين ، ومحلول الإيثانول بنسبة 70٪ ، ومحلول البيتادين ، ولف البطن بطريقة جراحية معقمة.
2. باستخدام شفرة # 15 ، ابدأ شق البطن عن طريق عمل شق خط وسط عمودي صغير لأسفل عبر جلد الأرنب بدءا من عملية الخنجري. يجب أن يكون هذا محسوسا بسهولة ويميل إلى أن يكون بحجم فلس أمريكي تقريبا. انظر الشكل 1.
3. يعكس الجلد ويحدد الخط الآلبا. يجب أن يكون هذا شريطا أبيض عاكس من الأنسجة ينتقل بشكل أدنى في خط الوسط. استخدم تشريحا حادا لاجتياز الخط الطائر وكشف الصفاق. انظر الشكل 2.< / > ملاحظه: يمكن التعرف على الصفاق بسهولة لأنه سيكون يغطي الأمعاء مباشرة ، والذي يمكن رؤيته يتحرك مع التنفس.
   أنذر: يميل الصفاق إلى الالتصاق بالأمعاء الأساسية بسبب التوتر السطحي. يساعد استخدام الصدمة الحادة لتشريح الخط الآلبا على تبديد خطر ثقب الأمعاء الأساسية.
4. بمجرد أن يتعرض الصفاق ، قم بتشريحه بعناية لدخول التجويف البريتوني. يمكن الآن التعرف على الكبد. للتنقل بشكل أفضل في مساحة البطن ، قم بتمديد شق خط الوسط 1 - سم من خلال الجلد والعضلات والصفاق.
   ملاحظه: يمكن تمديد شق خط الوسط بسهولة وأمان عن طريق إدخال هدموسات منحنية بعناية في الفضاء البريتوني مع توجيه الطرف المنحني بشكل سطحي نحو الصفاق. ثم افتح الإرقاء قليلا واستخدم شفرة للطيف الأنسجة بين ذراعي المرقئ.
5. تحديد الفص الأيسر للكبد من أجل تحديد موقع لزرع الورم. الفص الأيسر هو الجزء السفلي الجانبي للفص الإنسي الذي يقع في خط الوسط.
6. قبل محاولة سحب الكبد من الفضاء البريتوني ، ضع قطعة جافة من الشاش في الجانب السفلي من الشق.
   ملاحظه: سيوفر الشاش سطحا ملتصقا لوضع الكبد عليه لمنعه من التراجع مرة أخرى إلى البطن.
7. باستخدام ملقط غير رضحي أو قطعة من الشاش المبلل فوق الأصابع ، اسحب الفص الأيسر من الكبد بعناية من البطن من خلال الشق وضعه على الشاش الجاف الموضوع مسبقا. انظر الشكل 3.< / > أنذر: كبسولة الكبد حساسة ويمكن أن تتمزق بسهولة. من الأهمية بمكان أن تكون لطيفا عند التعامل مع هذا العضو لمنع نزيف المحفظة و / أو كدمات الكبد و / أو الدموية في نهاية المطاف.
   ملاحظه: عادة ، يعلن الكبد عن نفسه بصريا عند دخوله الفضاء البريتوني. ومع ذلك ، إذا كانت معدة الأرنب منتفخة ، فيمكن دفع الكبد بعيدا عن الأنظار. إذا كانت هذه هي الحالة ، ارفع جدار البطن برفق باستخدام مسبار حاد. في هذا السيناريو ، يميل الكبد إلى الالتصاق بالجانب البطني للحجاب الحاجز بسبب التوتر السطحي ، لذا افصل الكبد بعناية باستخدام مسبار غير حاد ويجب فصله. ثم استخدم ملقط غير رضحي لسحب الكبد.
8. في هذه المرحلة ، قم بإعداد أنسجة الورم للزرع وضع قطعة من الشاش المبلل على الكبد لحمايته.
9. اختر قطعة 1 -³ مم من أنسجة الورم المعالجة مسبقا لزرعها في الكبد. انظر الشكل 4.
10. باستخدام شفرة # 11 ، قم بثقب أنسجة الكبد بزاوية 45 درجة لعمل جيب بعمق 0.5 سم ، مع الحرص على عدم اختراق الجانب الظهري لكبسولة الكبد. اترك الشفرة في مكانها بعد إجراء الثقب. انظر الشكل 5.
11. ارفع الشفرة برفق في الاتجاه البطني لإنشاء جيب صغير في فراش الكبد. خذ قطعة الورم باستخدام ملقط ، ضع قطعة الورم في هذا الجيب ثم قم بإزالة الشفرة.
    ملاحظه: يمكن إزالة الشفرة قبل إدخال قطعة الورم ، ومع ذلك ، سوف ينزف الكبد وهذا يمكن أن يحجب موقع البزل مما يجعل من الصعب التعرف عليه.
    أنذر: تأكد من تقليل ملامسة الورم لأي هياكل أخرى لمنع بذر الورم غير المقصود. يمكن أيضا تجنب ذلك عن طريق وضع أي أدوات تستخدم للمساعدة في الزرع بعد ذلك.
12. في هذه المرحلة، ضع قطعة من عامل مرقئ، مثل رغوة الجل، فوق جيب الورم لتعزيز الإرقاء ومنع طرد قطعة الورم.
13. أعد الكبد إلى البطن بمجرد تأكيد الإرقاء.
14. أغلق جدار البطن بخياطة 3-0 بولي ديوكسانون على إبرة مستدقة باستخدام غرزة مستمرة بسيطة وأغلق الجلد بخيوط 4-0 بولي جلكتين 910 على إبرة قطع باستخدام غرزة مستمرة تحت الجلد.
    أنذر: عند إغلاق جدار البطن ، احرص على عدم إتلاف الثرب أو هياكل الأمعاء الأخرى في رمي خياطة.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: عملية الخنجري المكشوفة. انعكس الجلد والعضلات الأساسية للسماح بتصور عملية الخنجري (السهم الأسود) والأمعاء (السهم الأبيض). يشير النجم الأبيض إلى اتجاه الجمجمة.

< p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 2: لينيا ألبا. انعكست الجلد واللفافة المغطى للسماح بتصور...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ماكينة قص الشعر وال هاتف: 41870-0438 الكيتامين هنري شاين 56344 زيلازين أكورن 59399-110-20 Hemostat المنحني WPI 501288 ملقط غير رضحي سكلار 52-5077 الشاش ميدلاين NON21430LF 15 شفرة ستيريس 02-050-015 11-شفرة ستيريس 02-050-011 جراحي إيثيكون 1951 3-0 PDS / تفتق إيثيكون Z305H 4-0 فيكريل / قطع إيثيكون J392H