حصاد الغضروف المفصلي من مفاصل متبرع بالخيول: إجراء جراحي لعزل النسيج الضام الوعائي من مفاصل الجثث لمتبرع بالخيول

الملخص

المصدر: Benders، K.E.M. et al. تصنيع سقالات المصفوفة المشتقة من الغضروف منزوعة الخلايا. J. Vis. Exp. (2019)

في هذا الفيديو ، نوضح استخراج الغضروف المفصلي من مفصل جثة الخيول. يمكن استخدام الغضروف المفصلي المعزول لمزيد من التحليل النهائي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE

< p class = "jove_title" >1. حصاد الغضروف المفصلي من المفاصل المانحة (الجثث)

1. قبل خطوة الحصاد ، قم بإعداد 1 لتر من محلول غسيل الغضروف ، الذي يتكون من محلول ملحي معقم مخزن بالفوسفات (PBS) ، مكمل ب 100 وحدة / مل بنسلين ، و 100 ميكروغرام / مل من الستربتومايسين ، و 1٪ (حجم / حجم) أمفوتريسين ب.
2. ارتد قفازات ومعطف مختبر أثناء عملية الحصاد بأكملها ، حيث يمكن للمتبرع أن يحمل مسببات الأمراض.
3. الحصول على مفصل سليم (جثث) لعزل الغضروف.
   ملاحظه: في هذه المرحلة ، لا يزال الجلد حول المفصل سليما. تم استخدام غضروف الخيول الخانق الذي تم الحصول عليه من الحصان في هذا البروتوكول ، ولكن يمكن أيضا استخدام مفاصل أخرى من الأنواع الأخرى.
4. قم بإزالة الجلد الموجود حول منطقة اهتمام المفصل باستخدام مشرط ومرطب جراحي. بالإضافة إلى ذلك ، قم بإزالة الدهون الزائدة والأنسجة العضلية ، إذا لزم الأمر ، دون الإضرار بالمفصل الأساسي. اختياريا ، انقل الجثة المعدة إلى خزانة السلامة البيولوجية.
5. لإجراء بضع المفصل ، أي فصل المفصل ، حدد أولا الموقع الذي يفصل فيه المفصل عن طريق تمديد وثني المفصل.
6. قم بإزالة المزيد من طبقات الدهون والعضلات والأوتار بعناية باستخدام مشرط وملاقط جراحية لفتح منطقة المفصل.
7. قم بعمل شق للوصول إلى تجويف المفصل.
   ملاحظه: يمتلئ تجويف المفصل بالسائل الزليلي ، والذي يمكن أن يتساقط من التجويف عند إجراء شق صحيح.
8. استمر في فتح المفصل تماما عن طريق قطع الأوتار التي تحافظ على تماسك المفصل.
9. افحص الغضروف بحثا عن أي ضرر عياني.
   ملاحظة: إذا لم يكن للغضروف المفصلي مظهر لامع وسلس أو في حالة وجود تقرحات أو شقوق أو عيوب واضحة ، فتخلص من الغضروف.
10. استخدم مشرطا معقما لإزالة الغضروف من العظم تحت الغضروف. اقطع وصولا إلى العظم تحت الغضروف لإزالة المنطقة العميقة من الغضروف (الشكل 1). لمنع الجفاف من الغضروف ، قم بالتنقيط بانتظام محلول غسيل الغضروف على الغضروف.
    ملاحظه: في هذا الوقت ، لا يهم حجم شرائح الغضروف.
11. اجمع شرائح الغضروف في أنابيب سعة 50 مل تحتوي على محلول غسيل الغضاريف المعد مسبقا (الشكل 2 أ).
12. بعد جمع الغضروف من جميع مجالات الاهتمام ، قم بتجميد شرائح الغضروف في النيتروجين السائل لمدة 5 دقائق.
13. انقل شرائح الغضروف إلى أنابيب سعة 50 مل وقم بتجميد شرائح الغضروف على الفور لمدة 24 ساعة في مجفف التجميد. اضبط مجفف التجميد على 0.090 ملي بار تقريبا بينما يكون مكثف الثلج -51 درجة مئوية (الشكل 2 ب).
14. قم بتخزين شرائح الغضروف في مكان جاف في درجة حرارة الغرفة حتى الاستخدام الآخر.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: ركبة الخيول بعد إزالة الغضروف كامل السماكة. تتم إزالة الغضروف من اللقمة باستخدام مشرط حتى يتم الوصول إلى طبقة الغضروف المتكلسة التي لا يمكن قطعها باستخدام مشرط.

< p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 2: خطوات متسلسلة في تكوين جز...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مفصل الجثة يمكن الحصول عليها كمواد راحة من الجزار المحلي أو المركز البيطري. محلول ملحي معقم مخزن بالفوسفات (PBS) البنسلين - ستربتومايسين جيبكو 15140 الأمفوتريسين ب ثيرمو فيشر العلمي 15290026 النيتروجين السائل مجفف بالتجميد سالمنكيب ألفا 1-2 LD زائد أجهزة الطرد المركزي (لأنابيب 50 مل) إيبندورف 5810 ص مشرط حامل مشرط مغرفة صغيرة