عزل الشريان الأورطي الخنازير: إجراء جراحي لاستئصال الشريان الأورطي الصدري من الخنازير المصغرة لتحليله

الملخص

المصدر: Zhao، Y.، et al. عزل وثقافة الخلايا البطانية الأبهرية الأولية من الخنازير المصغرة J. Vis. Exp. (2019)

في هذا الفيديو ، نوضح إجراء للاستئصال الجراحي للشريان الأورطي من الخنازير المصغرة. يمكن استزراع الخلايا البطانية التي يتم حصادها من الشريان الأورطي المعزول في ظروف المختبر لدراسة التخثر والاستجابات المناعية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

فئة

1. الجراحة والتحضير لعزل الخلايا البطانية الأبهرية الخنازير

1. تطهير غرفة العمليات بضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 1 ساعة والمطهر الطبي 84 السائل (محتوى الكلور المتاح 4.0٪ - 5.0٪ ، جدول المواد) قبل إجراء الجراحة.
2. بعد أن تلقى الخنزير المصغر حقنة عضلية مكونة من 15 مجم / كجم من الكيتامين و 15 مجم / كجم من هيدروكلوريد زيلازين و 0.05 مجم / كجم هيدروكلوريد فيناسيتين (الأحجام: 100 ميكرولتر / كجم ، جدول المواد) (الشكل 1 أ) ، قم بتأكيد حالة تخدير من خلال فحص المنبه المؤلم للخنزير (على سبيل المثال ، قرص أذن واحدة أو هز أحد الأطراف الأمامية) والمؤشر الفسيولوجي (على سبيل المثال ضغط الدم ، معدل ضربات القلب والجهاز التنفسي).
   ملاحظه: يمكن إعطاء حقنة نصف جرعة أخرى للخنزير إذا ظهرت عليه علامات الاستيقاظ.
3. قطع البطن بمشرط ، وكشف الوريد الأجوف السفلي وبالتالي حقن الهيبارين الصوديوم (5,000 U ، جدول المواد) في الوريد الأجوف السفلي مع حقنة 5 مل.
4. بعد خمس دقائق ، أدخل قسطرة في الشريان الأورطي البطني إلى الدم ، وقم بقطع جلد الصدر وشق الحجاب الحاجز بمشرط ثم قطع البطين الأيسر.
   ملاحظه: تأكد من القتل الرحيم للخنزير عن طريق فحص نبض الأبهر بعد دماء وقطع القلب.
5. استئصال الأضلاع بالملقط العظمي (جدول المواد) وفضح القلب والرئتين. ابحث عن الشريان الأورطي الخلفي للقلب والرئتين وقم بتثبيت الطرفين. اغسل الشريان الأورطي مرة واحدة باستخدام محلول غسيل مبرد مسبقا - محلول 1x PBS (درجة الحموضة 7.4) مع 1٪ (حجم / حجم) بنسلين / ستربتومايسين. (الشكل 1 ب ، ج).
6. اقطع الشريان الأورطي بالمقص واحتفظ بالشريان الأورطي مثبتا في كل طرف. استئصال الأنسجة الزائدة حول الشريان الأورطي باستخدام ملقط ومقص معقم. ضع الشريان الأورطي في أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل ، واغسل الشريان الأورطي بمحلول غسيل مبرد مسبقا 3x (30 مل لكل غسلة) ، وانقل الشريان الأورطي إلى المختبر (الشكل 1 د).

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: الإجراء الجراحي واستئصال الشريان الأورطي من خنزير مصغر. (أ) صورة لخنزير مصغر (باما). (ب) يتعرض الشريان الأورطي بعد شق البطن وبضع الصدر. (ج) يتم تثبيت الشريان الأورطي في كل طرف. (د) يوضع الشريان الأورطي في أنبوب سعة 50 مل مع عازلة للغسيل البارد.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 20 × محلول PBS (درجة الحموضة 7.4 ، خالي من النوكليز) سانغون للتكنولوجيا الحيوية B540627# 75٪ كحول طبي Guilin LiFeng اللوازم الطبية المحدودة الصين الملقط العظمي بكين HeLi KeChuang التكنولوجيا التنمية المحدودة الصين إتش إل - YGQ حقنة BOON يمكن التخلص منها (10 مل) جيانغسو ييلي المادة الطبية المحدودة الصين حقن الكيتامين المركب مصنع الأدوية البيطرية في شنيانغ ، الصين هيدروكلوريد الكيتامين: 0.3 جم / 2 مل ، زيلازين هيدروكلوريد: 0.3 جم / 2 مل ، هيدروكلوريد فيناسيتين: 1 مجم / 2 مل ملقط ShangHai الأدوات الطبية المحدودة الصين الهيبارين الصوديوم جيانغسو وانبانغ المستحضرات الصيدلانية الحيوية المحدودة الصين صبغة اليود Guilin LiFeng اللوازم الطبية المحدودة الصين خنزير مصغر (باما أو ووزيشان) كانغ يي الزراعة البيئية المحدودة ، الصين البنسلين / الستربتومايسين تقنيات الحياة 15070063# مقص ShangHai الأدوات الطبية المحدودة الصين مشرط جراحي ShangHai الأدوات الطبية المحدودة الصين 22#