$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >1. عزل الشرايين الهبدية الخلفية القصيرة
< p class = "jove_content" > تم الحصول على عيون الخنازير مع العصب البصري والأنسجة خارج العين مباشرة بعد الوفاة. تم نقل العيون المثول إلى المختبر في محلول ملحي مخزن بالفوسفات المثلج (PBS) واستخدامها على الفور.
< p class = "jove_content" >
ملاحظة: تنقسم عين الخنازير بشكل أساسي إلى الأقسام الأمامية (
الشكل 1 أ) والأقسام الخلفية (
الشكل 1 ب).
- ضع كرة العين في حجرة تشريح تحتوي على عازلة كريبس هينسيليت (K-H) الباردة. قم بقطع العضلات والأنسجة المحيطة بعناية باستخدام مقص Mayo الحاد.
ملاحظه: لتحضير المخزن المؤقت Krebs-Henseleit (K-H) ، قم بوزن المواد الكيميائية التالية (27.68 جم من كلوريد الصوديوم ، و 8.4 جم من NaHCO، و 3،1.4 جم من KCl ، و 1.18 جم من MgSO4 ، و 0.64 جم من KH2PO4) في أنبوب طرد مركزي مخروطي جاف ونظيف سعة 50 مل و 1.47 جم من CaCl2 و 8.0 جم من الجلوكوز في أنبوب آخر. يجب تخزين خليط مسحوق هذه المواد الكيميائية في مكان بارد وجاف. من الأفضل تحضير خليط CaCl2 ومسحوق الجلوكوز طازجا لمنع امتصاص الرطوبة والتكتل.
- قم بعمل شق بمشرط وقطع الكرة الأرضية على طول المستوى الاستوائي باستخدام زوج من مقص Mayo الحاد حتى يتم فصل العين إلى النصفين الأمامي والخلفي. قم بإزالة أكبر قدر ممكن من الجسم الزجاجي من النصف الخلفي للعين باستخدام زوج من الملقط القياسي.
ملاحظه: يسهل فصل كرة العين إلى نصفين عزل الشرايين الهدبية الخلفية القصيرة (sPCA) بسهولة دون وجود عين متحركة في طبق التشريح. ومع ذلك ، فإن هذه الخطوة ليست إلزامية. يمكن أيضا عزل الأوعية دون فتح كرة العين.
- استخدم دبابيس التشريح لتثبيت النصف الخلفي من العين بعناية مع جانب شبكية العين لأسفل وتوجيه العصب البصري لأعلى نحو المجريب.
- قم بقطع الأنسجة الضامة المحيطة بالعصب البصري برفق لفضح الأوعية الدموية خلف البصلية الأساسية باستخدام زوج من مقص زنبركي Student Vannas.
- يمكن رؤية sPCA على أنها فروع قصيرة للأوعية (بين 5-8 فروع) تخترق الصلبة وتحيط برأس العصب البصري بشكل محيطي (الشكل 1 ج). اعزل sPCA البصري والبعيد مع الأنسجة الضامة المحيطة باستخدام زوج من الملقط الدقيق من النوع 5 ومقص بضع المحفظة Vannas (الشكل 1D).
ملاحظه: تأكد من أن المخزن المؤقت KH يظل باردا طوال إجراء العزل. يوصى بشدة بتغيير المخزن المؤقت كل 20-30 دقيقة ، اعتمادا على درجة الحرارة المحيطة.
< p class = "jove_title" >2. إعداد العينة
- قم بإزالة الأنسجة الضامة برفق من الأجزاء الشريانية باستخدام ملاقط دقيقة للغاية من النوع 5 ومقص بضع المحفظة Vannas تحت مجهر مجسم واشطف الشرايين المعزولة في PBS المثلج لإزالة الملوثات وبقايا الدم.
ملاحظه: إذا لم تخضع العينات للخطوات التالية على الفور ، فقم بتجميدها في النيتروجين السائل وتخزينها في -80 درجة مئوية حتى الاستخدام الآخر.
