مقالة منهجية

نقل الأجنة إلى أرنب: إجراء لنقل الأجنة الموجهة بتنظير البطن إلى قناة البيض لنموذج الأرنب الأنثوي المتلقي للإباضة

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Garcia-Dominguez، X. et al.، نقل الأجنة طفيف التوغل وتزجيج الأجنة في مرحلة الجنين المثلى في نموذج الأرانب.

يصف هذا الفيديو تقنية نقل الأجنة إلى قناة البيض لأنثى أرنب متلقية عن طريق تنظير البطن. يسمح بإعادة تشكيل الأجنة في الأرانب أثناء هجرتها عبر قناة البيض ، مما يساعد في النهاية في الزرع الناجح. يمكن أيضا استخدام هذه التقنية للأجنة المخزنة بكفاءة جيدة.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. نقل الأجنة

  1. إعداد الإناث المتلقين
    1. استخدم فقط الإناث الناضجات جنسيا (> 4.5 أشهر).
    2. قبل أسبوع واحد من ET ، قم بتكييف الإناث مع نظام الضوء لمدة 16 ساعة / 8 ساعات في الظلام لبدء نمو البصيلات وتعزيز تقبل الإناث.
    3. حدد الإناث المتلقية ، مع ملاحظة انتفاخ ولون الفرج. إذا كان الفرج منتفخا ومحمرا ، فإن الأنثى تكون متقبلة.
    4. تحفيز الحمل الكاذب (الإباضة) عن طريق حقنة عضلية واحدة من 1 ميكروغرام من أسيتات بوسيرلين (نظير اصطناعي لهرمون إفراز موجهة الغدد التناسلية) بغض النظر عن وزن الجسم.
      ملاحظة: عادة ، 0.8 ميكروغرام هي جرعة مناسبة لتحريض الإباضة في الأرانب متوسطة الحجم (4-5 كجم) ، لذا فإن 1 ميكروغرام يضمن الإباضة بشكل عام.
    5. تحفيز الإباضة قبل عدة أيام مثل عمر الأجنة المراد نقلها (على سبيل المثال ، 70-72 ساعة قبل morula ET الطازجة).
  2. التخدير والتسكين
    1. قم بوزن الأرنب وقم بتحميل التخدير والمسكنات التالية.
      1. في حقنة 1 مل بإبرة 30 جرام: قم بتحميل زيلازين (5 مجم / كجم) وهيدروكلوريد بوبرينورفين (0.03 مجم / كجم). في حقنة أخرى 1 مل بإبرة حول الجمجمة 23G ، قم بتحميل هيدروكلوريد الكيتامين (35 مجم / كجم).
    2. امسك الأرنب وحقن خليط الزيلازين والبوبرينورفين في العضل.
    3. أدخل الإبرة حول الجمجمة مع الكيتامين في وريد الأذن الهامشي ، مع إدخال جميع محتويات المحقنة ببطء عن طريق الوريد.
    4. قم بإصلاح الإبرة واتركها مدخلة طوال الخطوات المتبقية لإدارة المزيد من التخدير إذا لزم الأمر.
    5. اترك الأرنب في القفص (نظيفا وبدون أي أخرى) على مرحلة دافئة.
    6. بمجرد فقدان الوعي ، ضع مرهم العين لتجنب جفاف العين والتحقق من عدم وجود فربكتيريا الجفنية.
      ملاحظه: يوفر هذا البروتوكول طائرة تخدير جراحية لمدة 30 دقيقة على الأقل. إذا كانت هناك حاجة إلى وقت أطول, حقن جرعات إضافية مع نصف كمية هيدروكلوريد الكيتامين الموصوفة في 1.2.1 بعد 30 دقيقة.
    7. راقب عمق التخدير عن طريق فحص منعكس الدواسة وحركة التنفس. تشير التغييرات في نمط التنفس إلى معدل غير منتظم وأسرع إلى فقدان مستوى التخدير المناسب.
    8. مراقبة لون الأغشية المخاطية (العينين والشفتين وما إلى ذلك) ومعدل التنفس (30-60 نفسا في الدقيقة) ومعدل ضربات القلب (120-325 نبضة في الدقيقة) ودرجة حرارة المستقيم (38-39.6 درجة مئوية).
    9. قبل ثماني ساعات من النقل ، امتنع عن الطعام عن لتجنب حجم الأمعاء الأكبر ونشاطها حتى تنتهي عملية ET. اترك حرية الوصول إلى المياه.
  3. تحضير الجنين
    1. قم بتسخين وسائط معالجة الأجنة إلى 25 درجة مئوية: الوسط الأساسي (BM) ، الذي يتكون من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (DPBS) من Dulbecco مكمل بنسبة 0.2٪ (وزن / حجم) من ألبومين مصل الأبقار.
    2. العمل تحت المجهر المجسم ، اشطف الأجنة الطازجة أو المذابة (الخطوة 2) باستخدام BM.
    3. باستخدام قفازات معقمة، قم بتوصيل قسطرة فوق الجافية 17G مهيأة بشكل مناسب بحقنة سعة 1 مل.
    4. استنشق 1 سم من BM في القسطرة ، متبوعا بفقاعة هواء صغيرة.
    5. استنشق 5-7 أجنة بحجم 10 ميكرولتر من BM ، متبوعة بفقاعة هواء صغيرة أخرى.
    6. قم بإنهاء تحميل القسطرة عن طريق شفط 1 سم من BM.
  4. نقل الأجنة
    1. ضع في اعتبارك استخدام القفازات العقيمة والعباءات والقناع لضمان بيئة معقمة.
    2. تعقيم الأدوات الجراحية وتنظيف الأسطح التي سيتم إجراء الجراحة فيها ومسحها بنسبة 70٪ من الإيثانول.
    3. قم بإجراء التخدير كما هو مفصل سابقا (الخطوة 1.2) ، والتحقق من فقدان ردود الفعل.
    4. احلق الفراء من البطن البطني بشفرة حلاقة كهربائية.
    5. تحضير البطن البطني بشكل معقم.
      1. نظف منطقة الجراحة وقم بإزالة أي شعر متبقي. اغسل منطقة الجراحة بصابون غلوكونات الكلورهيكسيدين. قم بتعقيم المنطقة بمحلول الكلورهيكسيدين والإيثانول 96 درجة (3 مرات).
    6. ضع على طاولة جراحية دافئة ، في وضع Trendelenburg (رأسه لأسفل عند 45 درجة) للتأكد من أن المعدة والأمعاء موجودة في الجمجمة. ضع في اعتبارك إخلاء المثانة إذا كانت منتفخة. في حالة تلف أي أحشاء في هذه العملية ، قد يموت. لذلك من المهم تحديد موقعها بشكل صحيح (الشكل 1).
    7. قم بتغطية المنطقة باستخدام منشفة معقمة ، مع وجود ثقب (فتحة) تكشف المنطقة المحلوقة ، لفصل موقع الجراحة عن أي مناطق ملوثة محتملة.
    8. أدخل مبزلا بالمنظار 5 سم في تجويف البطن ، و 2 سم ذيلية لعملية الخنجري ، وقم بنفخ التجويف البريتوني من خلاله باستخدام نفخ ميكانيكي منظم للضغط.
      ملاحظه: يجب أن يكون الضغط داخل البطن 8-12 مم زئبق مع ثاني أكسيد الكربون2 (الشكل 1 أ).
    9. أدخل كاميرا المنظار من خلال المبزل بالمنظار (الشكل 1 ب).
      ملاحظة: تحديد الجهاز التناسلي ، وتحديد حالة وموضع infundibulum و ampulla قبل ET لتسهيل الخطوات التالية.
    10. أدخل الإبرة فوق الجافية 17-G في المنطقة الأربية بين 2-3 سم من infundibulum (الشكل 1 ب).
    11. حدد مدخل infundibulum (الشكل 2 أ ، 2 ب).
    12. أدخل القسطرة المحملة (الخطوة 1.3) من خلال الإبرة فوق الجافية في البطن (الشكل 1C).
    13. حدد موقع قناة البيض وأدخل 1-2 سم من القسطرة فوق الجافية من خلال infundibulum في الأمبولة (الشكل 2A-2C). لا تتقدم بعيدا في قناة البيض لمنع التلف والنزيف.
    14. حرر الأجنة في قناة البيض عن طريق الضغط برفق على مكبس المحقنة المقترنة بالقسطرة (الشكل 2D-2F). يجب أن تخرج كلتا فقاعتي الهواء من القسطرة.
    15. قم بإزالة القسطرة بعد تحرير الأجنة مباشرة.
    16. شطف القسطرة والشفط وإطلاق وسيط التلاعب للتحقق من غياب الأجنة وتأكيد نقلها بنجاح.
    17. كرر الخطوات 1.4.11 إلى 1.4.16 في الجانب الآخر من الرحم ، إذا رغبت في ذلك.
    18. قم بإزالة الإبرة فوق الجافية وكاميرا المنظار الداخلي.
    19. حرر ثاني أكسيد الكربون2 من خلال المبزل بالمنظار. إذا بقي الغاز الزائد في بطن ، فسوف يشعر بالألم وعدم الراحة.
    20. قم بإزالة المبزل بالمنظار من تجويف البطن. قم بإزالة المنشفة الجراحية.
    21. توقف عن التخدير.
    22. نظف الشق الذي تم إجراؤه بواسطة المبزل بمحلول الكلورهيكسيدين. أغلق الشق الذي تم إجراؤه بواسطة المبزل بالألمنيوم الميكروني وضمادة بلاستيكية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: نقل الأجنة بالمنظار بمساعدة تنظير البطن (منظر خارجي).أ) إدخال المبزل بالمنظار (منفذ واحد). ب) إدخال الكاميرا بالمنظار والإبرة فوق الجافية (السهم الأسود). ج) إدخال قسطرة نقل الأجنة (السهم الأبيض) من خلال الإبرة فوق الجافية.

< p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ألبومين مصل الأبقار (BSA) VWR 332 ريال بوبرينورفين هيدروكلوريد ألفيت إسكارتي 626 م أن يطلبها طبيب بيطري مرخص. أسيتات بوسيرلين سيجما ألدريتش ب 3303 ثاني أكسيد الكربون اير سليمع 99921 CO2 N48. محلول ملحي مخزن بالفوسفات من Dulbecco (DPBS) سيجما ألدريتش د5773 بدون كلوريد الكالسيوم ماكينة حلاقة كهربائية أوستر جولدن A5 078005-140-002 كاميرا المنظار Optomic إسبانيا S.A OP-714 منظار داخلي مع صمام نشرة سيليكون Karl Storz Endoscopia Ibérica S.A. 30114 جي كي نموذج مبزل خفيف الوزن. صابون كلوريكسيدين ثنائي جلوكونات ألفيت إسكارتي 0265DCCJ500B إبرة Epicraneal 23G ألفيت إسكارتي 514056353 يمكن أيضا استخدام الإبر الأصغر. القسطرة فوق الجافية شركة Vygon 187.1 [م] إبرة فوق الجافية شركة Vygon 187.1 [م] مرهم العين ألفيت إسكارتي 5273 معدات تنظير البطن Karl Storz Endoscopia Ibérica S.A. 26003 أ منظار البطن هوبكنز® ، منظار البطن المستقيم 0 مم ، بطول 30 سم ، قناة عمل 5 مم. مصدر الضوء Optomic إسبانيا S.A فيبرولوكس 250 ثاني أكسيد الكربون الميكانيكي Karl Storz Endoscopia Ibérica S.A. إندوفلاتور® أنبوب سيليكون ل insufflato r Karl Storz Endoscopia Ibérica S.A. 20400040 مجهر مجسمة لايكا MZ16F هناك خيارات أرخص مثل Leica MZ8 أو Nikon SMZ-10 أو SMZ-2B ، على سبيل المثال لا الحصر. أرانب جامعة بوليتكنيكا دي فالنسيا السطر أ يمكن استخدام خطوط الأمومة الأخرى ، مثل الخط الخامس أو الخط HP.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة