توصيل الجينات القائمة على الفيروس المرتبط بالأدينو المؤتلف: تقنية لتوصيل الجينات المعدلة والتعبير الخاص بالقلب في نموذج القوارض

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Ding، J. et al. تحضير rAAV9 للإفراط في التعبير عن الجينات أو ضربها القاضي في قلوب الفئران. J. Vis. Exp. (2016)

في هذا الفيديو ، نوضح توصيل الجينات القائم على الفيروس المرتبط بالأدينو المؤتلف في جرو الفأر. تساعد هذه الطريقة في دراسة التعبير الجيني في الخلايا المستهدفة.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. علاج الفئران حديثي الولادة ب rAAV9 عند P0.5-P2.5 عن طريق الحقن تحت الجلد.

1. املأ مسبقا حقنة أنسولين مقاس 29G1/2 ، 0.33 × 12.7 مم بمحلول الفيروس 9 المرتبط بالغدة المؤتلف (rAAV9). احرص على إزالة فقاعات الهواء.
2. أمسك الجرو المخدر بالتبريد بيد واحدة بالإبهام والسبابة. قبل الحقن ، اسحب الجلد الخلفي للجرو بعصا مسحة مشبعة بكحول الأيزوبروبيل بنسبة 70٪ للحفاظ على الحالة المعقمة. أدخل إبرة المحقنة في الجزء السفلي الأمامي الظهري للحيوان بزاوية من 5 إلى 10 درجات. حقن 50-70 ميكرولتر من محلول rAAV9 باستخدام حقنة الأنسولين.
   ملاحظة: يمكن أيضا توصيل rAAV9 إلى الماوس عن طريق الحقن داخل الصفاق أو الوريد. يمكن الحصول على التعبير الفعال عن الجينات التي يتم تسليمها في القلب. ومع ذلك، قد يؤدي الحقن داخل الصفاق في بعض الأحيان إلى تسرب التعبير في الكبد. بعد الحقن ، تمت مراقبة حالة الجراء كل يوم.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات متجه rAAV9 بن فيكتور كور ص 1967