نقل الجينات بوساطة بيولوجية: تقنية لتوصيل الجين ذي الأهمية في الخلايا المستهدفة عبر مسدس جيني بيولوجي

الملخص

المصدر: Taylor ، T. ، et al. التحول البيولوجي لجين موسوم بالفلورسنت إلى مسببات الأمراض الفطرية الانتهازية Cryptococcus neoformans. J. Vis. إكسب. (2015).

في هذا الفيديو ، نوضح بروتوكول توصيل الجينات بوساطة الجينات البيولوجية في الخلايا المستنبتة. توفر هذه الطريقة طريقة بسيطة للتحول الجيني المستقر باستخدام كمية قليلة من الحمض النووي.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. تحضير الحمض

النووي

1. قم بإعداد أقراص بيولوجية برتقالية عن طريق غمرها في 100٪ من الإيثانول باستخدام الملقط. ضع الأقراص في طبق بتري كبير يحتوي على المجفف حتى يجف (تأكد من أن المجفف لا يلمس الأقراص).
2. بمجرد أن يجف ، اضغط على أقراص الناقل الكبير في حاملات الأقراص الفضية (التي تم مسحها مسبقا بالإيثانول بنسبة 100٪).
3. حبات الناقل الذهبي الدوامة معلقة في 100٪ من الإيثانول و aliquot 12 ميكرولتر في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل ، أنبوب واحد لكل تحويل.
4. أضف إلى كل أنبوب بالترتيب: 2 ميكروغرام من الحمض النووي (يفضل 2 ميكرولتر من 1 ميكروغرام / ميكرولتر من الحمض النووي) ، 10 ميكرولتر 2.5 م كلور كالسبير₂ ، و 2 ....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 0.6 ميكرومتر حبات ذهبية بيو راد 165-2262 http://www.bio-rad.com قاعدة خالية من المنوية سيجما- ألدريتش S0266 https://www.sigmaaldrich.com 1350 رطل لكل بوصة مربعة أقراص تمزق بيو راد 165-2330 http://www.bio-rad.com شاشات التوقف بيو راد 165-2336 http://www.bio-rad.com أقراص Macrocarriers بيو راد 165-2335 http://www.bio-rad.com نظام PDS-1000 / He بيو راد 165-2257 http://www.bio-rad.com جهاز طرد مركزي Microfuge 18 بيكمان كولتر F241.5P www.beckmancoulter.com