مقالة منهجية

تلطيخ أحمر النيل: تقنية للكشف عن الدهون المحايدة داخل الخلايا وقياسها في الطحالب

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_content" >المصدر: Storms ، Z. J. et al. بروتوكول بسيط وسريع لقياس الدهون المحايدة في خلايا الطحالب باستخدام التألق. J. Vis. Exp. (2014)

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا لاكتشاف وقياس الدهون المحايدة في خلايا الطحالب عن طريق تلطيخها بصبغة النيل الحمراء.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. القياس الكمي الفلوري للدهون المحايدة باستخدام النيل الأحمر

ملاحظة: هناك حاجة إلى 10 ميكرولتر فقط من تعليق الطحالب عند 5 جم / لتر لقراءة التألق. بشكل عام ، يعد عزل الكتلة الحيوية للطحالب الجافة من 1.5 مل من مرق الاستزراع أكثر من كاف. أيضا ، يمكن أن تتحلل شدة ضوء المصباح في مقياس الطيف الضوئي بمرور الوقت. يوصى بإدراج معايير في كل تجربة للتأكد من أن الاختلافات في الجهاز لا تضيف خطأ غير ضروري إلى القياسات.

  1. تحضير محلول النيل الأحمر بتركيز 10 ميكروغرام / مل مذاب في الإيثانول بدرجة كاشف الكحول. قم بتخزين هذا المحلول في الظلام عند 4 درجات مئوية.
  2. قم بإعداد محلول إيثانول بنسبة 30٪ (حجم / حجم) في ماء منزوع الأيونات وتخزينه في درجة حرارة 4 درجات مئوية.
  3. تحضير جميع عينات الطحالب بنفس تركيز الكتلة الحيوية (يوصى ب 5 جم / لتر) وبنفس طريقة المعايير المستخدمة في القياس. افعل ذلك إما عن طريق تعليق العينات المجففة مسبقا في الكمية المناسبة من مخزن الفوسفات (0.6 جم / لتر فوسفات البوتاسيوم ثنائي القاعدة ، 1.4 جم / لتر فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة) ، أو ضبط تركيز زراعة الطحالب المتنامية إلى 5 جم / لتر مع مخزن الفوسفات المؤقت بعد قياس التعكر.
    ملاحظة: غالبا ما يكون للقياسات التي يتم إجراؤها على مزارع الطحالب الحية خطأ أكبر مرتبط بها اعتمادا على دقة منحنى معايرة التعكر. قد يتطلب تعليق العينات المجففة استخدام الخالط لتشتيت الكتلة الحيوية بالكامل.
  4. لكل عينة ، اخلطي 80 ميكرولتر من محلول الإيثانول بنسبة 30٪ ، و 10 ميكرولتر من محلول النيل الأحمر ، و 10 ميكرولتر من معلق الطحالب في بئر واحد من صفيحة 96 بئرا. من أجل حساب تباين قياس التألق بشكل صحيح ، قم بإجراء 5 تكرارات لكل عينة.
  5. قم بتشغيل منحنى معايرة من نقطتين مع المعايير من أجل حساب الاختلافات اليومية في الجهاز والإعداد. قم بإعداد معايير قياس التألق باستخدام نفس الإجراء مثل العينات.
    ملاحظة: بشكل عام ، نقطتان تكفيان لإعادة معايرة الجهاز ، ويمكن تشغيل ثلاث نقاط للتحقق من الخطية.
  6. قم بإجراء قياسات التألق في مقياس الطيف الضوئي لقارئ الألواح متعدد الآبار. تم العثور على الشروط التالية لتحقيق النتائج الأكثر اتساقا:
    1. رج العبوة عند 1,200 دورة في الدقيقة ، مدار 3 مم ، لمدة 30 ثانية.
    2. احتضان عند 40 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
    3. رج العبوة عند 1,200 دورة في الدقيقة ، مدار 3 مم ، لمدة 30 ثانية.
    4. سجل التألق ، الإثارة عند 530 نانومتر ، الانبعاث عند 604 نانومتر.
  7. قم بتحويل قياسات التألق إلى محتوى الزيت باستخدام نتائج المعايير الداخلية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 25 مل ماصات يمكن التخلص منها صياد 13-676-10 ك لمبة الماصة صياد 13-681-51 1.5 مل أنابيب الطرد المركزي الدقيقة صياد 05-408-129 أنابيب الطرد المركزي 40 مل (FEP) صياد 05-562-16 أ يمكن أيضا استخدام الأنابيب الزجاجية ماصات زجاجية باستور صياد 13-678-20 ج النيل الأحمر سيغما N3013-100 ملغ الإيثانول (درجة كاشف الكحول) صياد AC65109-0020 مجهر Leica DMRXA2 (أو ما يعادله) لايكا DMRXA2 قارئ لوحة متعدد الآبار الفلورية أنظمة المختبر الحراري فلوروسكان أسين برنامج قارئ التألق أنظمة المختبر الحراري الصعود البرمجيات 2.6 كوستار 96 لوحة بئر مع قاع دائري صياد 06-443-2

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة