تلطيخ Cresyl Violet لأقسام الأنسجة: إجراء تلطيخ لتصور الغضاريف والعظام في أقسام جنين الفئران المجمدة

الملخص

المصدر: Wu ، Meng ، et al. ، التشريح المجهري لالتقاط الليزر للغضروف الجنيني والعظام للفأر لتحليل التعبير الجيني. J. Vis. Exp.(2019)

يصف هذا الفيديو إجراء تلطيخ كريسيل البنفسجي لتصور العظام والغضاريف في الأقسام الإكليلية لأجنة الفئران المجمدة. تساعد تقنية التلوين هذه على التمييز بين العظام والغضاريف بألوان مميزة عن الأنسجة المحيطة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

فئة

1. تحضير عينة للتشريح الدقيق لالتقاط الليزر

1. تحضير حلول للتلطيخ والجفاف.
   1. ضع 45 مل من 80٪ من الإيثانول في كل من ثلاثة أنابيب طرد مركزي سعة 50 مل على الجليد. قم بتسميتهم على أنهم #1 و #2 و #3. خفف الإيثانول بالماء الخالي من RNase / DNase.
   2. ضع 45 مل من الإيثانول بنسبة 95٪ في أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل على الجليد.
   3. ضع 45 مل من الإيثانول بنسبة 100٪ في أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل على الثلج.
   4. ضع 45 مل من الزيلين في أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل في درجة حرارة الغرفة.
      تنبيه: يجب استخدام الزيلين في غطاء الدخان.
2. قم بإذابة شريحة غشاء PEN لفترة وجيزة عن طريق وضعها على يد مرتدية قفازا ، ثم اغسلها مرتين لمدة 30 ثانية لكل منها 45 مل من 80٪ من الإيثانول (# 1 و # 2) مع التحريك في أنابيب الطرد المركزي سعة 50 مل لإزالة OCT.
   ملاحظة: من المهم إزالة OCT قبل تلطيخها ، لمنع OCT المخفف أثناء التلوين من حجب الأقسام. يمكن استخدام الملقط لتسهيل إزالة OCT الذي لا يتم غسله عن طريق التحريض.
3. ضع الشريحة على ورقة من رقائق الألومنيوم. ماصة 0.8 مل من بنفسج كريسيل 0.1٪ في 50٪ إيثانول على الشريحة وتلطيخ لمدة 30 ثانية. اغسل الشريحة في 45 مل من 80٪ إيثانول (# 3) لمدة 30 ثانية ، ثم قم بتجفيفها عن طريق المرور لمدة 30 ثانية لكل منها 45 مل من 95٪ إيثانول ، و 100٪ إيثانول ، والزيلين في أنابيب الطرد المركزي سعة 50 مل.
4. قف ينزلق على ممسحة مهمة دقيقة لمدة 5 دقائق لتصريف الزيلين والأقسام الجافة.

المواد