تلطيخ قطرات الدهون لخلايا ذبابة الفاكهة اليرقات: تقنية لتقييم تراكم قطرات الدهون في ظل الظروف الطبيعية والمجهدة باستخدام صبغة قائمة على BODIPY

الملخص

المصدر: Wei، C.، et al.، تشريح وتلوين قطرات الدهون للخلايا النبوية في ذبابة الفاكهة يرقات. J. Vis. إكسب. (2019).

يوضح هذا الفيديو تلطيخ قطرات الدهون في ذبابة الفاكهة الخلايا اليرقاتية - الخلايا الشبيهة بالخلايا الكبدية - باستخدام صبغة BODIPY الفلورية المحبة للدهون. تعمل هذه الخلايا كنموذج لدراسة التمثيل الغذائي للدهون أثناء التطور واستجابة للإجهاد البيئي مثل الجوع.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. علاج الجوع لليرقات

ملاحظة: في يرقات الطور الثالث ، هناك عدد قليل من قطرات الدهون التي يمكن اكتشافها أو لا توجد قطرات دهنية يمكن اكتشافها في الخلايا الغريبة في ظل ظروف التغذية العادية ، ولكن يمكن إحداث العديد من قطرات الدهون الكبيرة في الخلايا الكريمة في ظل ظروف الإجهاد ، مثل الجوع. لمزيد من التحقق من هذه الطريقة ، من الضروري المعالجة المسبقة لهذه اليرقات للحث على التكوين الحيوي لقطرات الدهون في الخلايا الكريمة. هنا ، تم اختيار مسار زمني للتجويع من 12 ساعة و 24 ساعة و 36 ساعة كنموذج. على وجه الخصوص ، فترة قصيرة من الجوع (على سبيل المثال ، 3 ساعات) كافية للحث على قطرات دهنية يمكن اكتشافها في الخلايا ا....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات أنبوب الطرد المركزي 50 مل كورنينج 430829 50 مل طبق بتري 6 سم ثيرمو فيشر 150326 6 سم اجار لطعام الذباب رقائق الألومنيوم غير متاح غير متاح حماية القيقب من الضوء بوديبي 493/503 إنفيتروجين د3922 صبغة تلطيخ قطرات الدهون مجهر متحد البؤر لايكا لايكا TSC SP5 التصوير متحد البؤر شراب الذرة لطعام الذباب دقيق الذرة لطعام الذباب غطاء سيتوغلاس 10212424 ج 20 × 20 مم ، بسمك 0.13-0.17 دبوس التشريح غير متاح غير متاح لوحة تشريح غير متاح غير متاح ورق الترشيح غير متاح غير متاح القطر: 11 سم المخزن المؤقت للتثبيت غير متاح غير متاح 4٪ بارافورمالدهيد (PFA) في 1x
برنامج تلفزيوني ملقط دومونت 11252-30 #5 حاضنه جيانغنان SPX-380 لثقافة الذباب أنبوب الطرد المركزي الدقيق أكسايجن MCT-150-C 1.5 مل شريحة الفحص المجهري سيتوغلاس هاتف: 10127105P-G تصاعد الوسط VECTASHIELDAتركيب التركيب
متوسط إتش -1000 وسيط تركيب مضاد للبهتان طلاء الأظافر بانيرا AAPR419 ختم الغطاء الرسام غير متاح غير متاح برنامج تلفزيوني غير متاح غير متاح 1x PBS (137 ملي كلوريد الصوديوم ، 2.7 ملي < / > KCl ، 10 ملم Na_{2} HPO_{4} ، 1.8 ملم < / > KH_{2} PO_{4} ، الرقم الهيدروجيني 7.4) المدوره أدوات مختبر Kylin-Bell WH-986 مقص سمارت داتا الطبية ريال81 مقص الربيع Vannas دقيق الصويا لطعام الذباب ملعقه غير متاح غير متاح طعام دقيق الذرة القياسي غير متاح غير متاح الترميز وفقا لمعيار بلومنجتون
وصفة طعام دقيق الذرة مجهر ستيريو لايكا لايكا S6E لتشريح الأنسجة مسح الورق غير متاح غير متاح خميرة لطعام الذباب