$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
فئة
1. محلول تلطيخ LCO
ملاحظة: إذا تم شراء hFTAA من مورد تجاري ، فيرجى اتباع تعليمات البائع بدلا من القسم 1.
- أعد تعليق hFTAA المجفف بالتجميد في 2 ملي هيدروكسيد الصوديوم لتحضير محلول مخزون بمقدار 1 مجم / مل. احتفظ بالمرق في قارورة زجاجية عند 4 درجات مئوية. يمكن تخزين المخزون لمدة عام واحد.
- في يوم التلوين ، قم بإعداد محلول عملي عن طريق تخفيف المخزون 1: 10،000 في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS).
< p class = "jove_title" >
2. تحضير عينات الأنسجة
ملاحظة: يمكن تصوير العديد من أنواع الأنسجة باستخدام hFTAA كعلامة أميلويد. انظر الشكل 1 للحصول على أمثلة. hFTAA حساس للتشكل الكلي. ومن ثم يفضل إجراء التلوين على الركام غير المتقطع دون التعرض للحاتمة. يتم تحقيق الجودة الطيفية المثلى إذا تم الحفاظ على تثبيت الأنسجة إلى الحد الأدنى. ومن ثم يفضل استخدام المواد المجمدة الطازجة ، المثبتة برفق في الإيثانول في وقت التلوين. ومع ذلك ، من الممكن اكتشاف رواسب الأميلويد أيضا في الأنسجة التي تم إصلاحها بالفورمالين على سبيل المثال. يخترق hFTAA الأنسجة بشكل جيد. حدد سماكة العينة المتوافقة مع تقنية التصوير المقصودة.
- إذا تم استخدام أقسام مثبتة بالفورمالين ، وأجزاء مدمجة في البارافين ، وإزالة البارافين في الزيلين طوال الليل. اغمس الأقسام في حمامات متتالية من 99٪ إيثانول ، 70٪ إيثانول ، dH2O ، و PBS ، 10 دقائق في كل منهما. اترك أقسام الأنسجة تجف في ظل الظروف المحيطة. تحذير: يتم التعامل مع الزيلين دائما في غطاء دخان كيميائي. الزيلين والمذيبات العضوية الأخرى ضارة.
- قم بإذابة المقاطع البردية في درجة حرارة الغرفة. قم بإصلاح أقسام الأنسجة في 10٪ فورمالين طوال الليل وأعد ترطيبها عن طريق غمسها في حمامات متتالية بنسبة 99٪ إيثانول ، و 70٪ إيثانول ، و dH2O ، و PBS ، لمدة 10 دقائق في كل منهما. اترك أقسام الأنسجة تجف في ظل الظروف المحيطة.
- أضف قطرات من محلول عمل hFTAA (حوالي 200 ميكرولتر) إلى أقسام الأنسجة لتغطيتها. يجب أن تبقى القطرة في مكانها بسبب التوتر السطحي. احتضن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة للتلطيخ.
- اشطف محلول التلوين ب 500 ميكرولتر PBS باستخدام ماصة ثم اغمر الشريحة في حمام PBS لمدة 10 دقائق. اترك القسم يجف في الظروف المحيطة.
- قم بالتركيب باستخدام وسط تركيب الفلورة. اسمح لوسط التركيب بالاستقرار بين عشية وضحاها.
ملاحظة: يمكن إجراء تلطيخ hFTAA مع طرق التلوين الأخرى مثل التألق المناعي ، والعلامات الخاصة بالخلية أو العضية ، وما إلى ذلك. لإجراء التلوين المشترك ، قم بتشغيل بروتوكول التلوين الكامل الذي تختاره وأضف تلطيخ hFTAA في النهاية ، بدءا من الخطوة 2.2. انظر الشكل 2 للحصول على أمثلة. بالنسبة للتألق المناعي ، يفضل اختيار جسم مضاد ثانوي متحمس عند 640 نانومتر أو أعلى. في نطاق الطول الموجي هذا ، لا يمتص hFTAA وبالتالي لا يمكن إثارته ولن يتألق. هذا يضمن عدم وجود نزيف بين hFTAA والجسم المضاد.
