$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< ص الفئة = "jove_title" >
1. تلطيخ الدماغ وتقطيعه
- بعد تجربة انسداد الشريان الدماغي الأوسط ، قم بإزالة الدماغ ، بما في ذلك جذع الدماغ ، من الجمجمة ، واغسله في PBS المثلج.
- اختر الحجم الصحيح لمصفوفة الدماغ المصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ (انظر جدول المواد) اعتمادا على وزن (الشكل 1 ب). ضع الدماغ مع جانبه البطني لأعلى في مصفوفة الدماغ.
ملاحظه: عند الجلوس في المصفوفة ، يجب أن يكون السطح البطني للدماغ موازيا للسطح العلوي للقالب.
- باستخدام الشفرات ، قم بتقييد الأجزاء الأمامية والذيلية (2 شفرات من كلا الجانبين) من الدماغ.
ملاحظه: يجب استخدام شفرات الحلاقة المتوافقة مع مصفوفة التقطيع. بشكل عام ، يمكن استخدام شفرة حلاقة متوافقة أحادية الحافة (سمك يصل إلى 0.01 بوصة (0.254 مم)) لتقطيع دماغ الفئران.
- ضع الشفرات جزئيا (لا تقطع الدماغ بالكامل) في القنوات بين الشفرتين الأولى والأخيرة. عندما يتم إدخال جميع الشفرات وترتيبها بالتوازي ، اضغط على جميع الشفرات لأسفل براحة اليد في نفس الوقت لتقطيع الدماغ إلى شرائح إكليلية بحجم 2 مم.
- أمسك الشفرات بإحكام على طول الجانبين بإصبعين وقم بإزالتها مع الدماغ المقطع من المصفوفة.
- رتبي شرائح الدماغ واحدة تلو الأخرى في صينية (70 مل ، 72 × 72 مم). عند ترتيب الشرائح ، تأكد من أن السطح الأمامي لكل شريحة متجها دائما لأعلى.
- صب محلول TTC الدافئ (+37 درجة مئوية) 1٪ في PBS على شرائح الدماغ واحتضانها لمدة 8 دقائق عند 37 درجة مئوية في الظلام.
ملاحظه: يجب غمر شرائح الدماغ بالكامل في محلول TTC أثناء الحضانة.
- بعد الحضانة في محلول TTC بنسبة 1٪ ، انقل شرائح الدماغ إلى الدرج البلاستيكي الأزرق لالتقاط الصور. رتب شرائح الدماغ بترتيب تسلسلي من الجزء الأمامي إلى الجزء الذيلي واستخدم مشرطا لفصل نصفي الكرة الأرضية في المستوى السهمي.
