تلطيخ Papanicolaou: تقنية لتصور السمات الخلوية للخلايا البوقية

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Chen ، H. et al. علم الخلايا البوقية لقناة فالوب كأداة واعدة للكشف المبكر عن سرطان المبيض. J. Vis. Exp. (2017).

في هذا الفيديو ، نوضح بروتوكولا معدلا لتلوين Papanicolaou لدراسة علم الخلايا البوقية. يمكن استخدام هذه التقنية لتصور السمات الخلوية للخلايا الظهارية لقناة فالوب الخبيثة وغير الخبيثة.

البروتوكول

1. تعديل بروتوكول تلطيخ Papanicolaou

1. تلطيخ الشرائح الملطخة بالأنسجة عن طريق تشغيل إجراء البقع غير النسائية الآلي ، كما هو موضح في الجدول 1.
   ملاحظة: تمثل طريقة التلوين تعديلا لتقنية تلطيخ Papanicolaou التي نستخدمها بشكل روتيني للعينات غير النسائية. نستخدم معالج أنسجة آلي لتلطيخ بعض الشرائح. اخترنا إجراء تلطيخ غير النساء على إجراء تلطيخ النساء في هذه الدراسة. Eosin المستخدم هو EA-65 ، بدلا من EA-50 المستخدم في عينات أمراض النساء (عينة مسحة عنق الرحم). بالإضافة إلى ذلك ، لا يتم تضمين OG-6 في إجراء تلطيخ النساء والتوليد ، والذي يستخدم بشكل أساسي تلطيخ الخلايا الحرشفية ، في إجراء التلوين حيث لا يتوقع رؤية خلايا حرشفية في هذه الدراسة. EA65 (Eosin Azure) هو محلول مضاد للبقع يتكون من 3 أصباغ: Eosin Y و Fast green FCF و Bismarck brown Y. الإجراء موضح في الجدول 1.
2. قم بإجراء وصمة عنق الرحم اليدوية السريعة على النحو التالي:
   1. اغمس الشريحة الملطخة بالأنسجة في 95٪ من الإيثانول ، 10 مرات ، مع كل غمس يستغرق حوالي 1 ثانية.
   2. اغمس الشريحة في H₂O ، 10 مرات ، مع كل غمس يستغرق حوالي 1 ثانية.
   3. اخرج الشريحة في الهيماتوكسيلين لمدة 10 - 60 ثانية.
   4. اغمس الشريحة في H₂O ، 10 مرات ، مع كل غمس يستغرق حوالي 1 ثانية.
   5. اغمس الشريحة في 95٪ من الإيثانول ، 10 مرات ، مع كل تراجع يستغرق حوالي 1 ثانية.
   6. اخرج الشريحة في EA65 لمدة 1 - 3 دقائق.
   7. اغمس الشريحة في H₂O ، 10 مرات ، مع كل غمس يستغرق حوالي 1 ثانية.
   8. اغمس الشريحة في 95٪ من الإيثانول ، 10 مرات ، مع كل تراجع يستغرق حوالي 1 ثانية.
   9. اغمس الشريحة في الزيلين حتى تصبح الشريحة واضحة.
      ملاحظة: هذا إجراء تلطيخ Papanicolaou معدل. تستخدم هذه الطريقة كطريقة أكثر سرعة للبقع للحالات ذات الوقت أو المساحة المحدودة مثل شفط الإبرة الدقيقة في الموقع وعينات STAT. يوفر هذا الإجراء تلطيخا عالي الجودة مثل إجراء البقع الآلي غير الجيني. ويبين الجدول 2 الإجراء هذا الإجراء.

الجدول 1: خطوات البقع غير النسائية.

95٪ إيثانول 5 دقائق H2O 10 ثوان الهيماتوكسيلين 15 ثانية - 3 دقائق H2O المقطر 5 دقائق 95٪ إيثانول 30 ثانية EA65 2 - 5 دقائق 95٪ إيثانول 30 ثانية 95٪ إيثانول 30 ثانية 100٪ إيثانول 30 ثانية 100٪ إيثانول 30 ثانية الزيلين 30 ثانية الزيلين 5 دقائق

الجدول 2: خطوات وصمة عنق الرحم السريعة اليدوية.

95٪ إيثانول 10 انخفاضات H2O 10 انخفاضات الهيماتوكسيلين 10 ثانية - 1 دقيقة H2O المقطر 10 انخفاضات 95٪ إيثانول 10 انخفاضات EA65 1 - 3 دقائق 95٪ إيثانول 10 انخفاضات 100٪ إيثانول 10 انخفاضات الزيلين تراجع حتى تصبح صافية

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Papanicolaou Stain ، EA 65 سيجما ألدريتش HT40432 95٪ إيثانول سيجما ألدريتش 652261 100٪ إيثانول سيجما ألدريتش 493538 الزيلين سيجما ألدريتش 214736 الهيماتوكسيلين سيجما ألدريتش H9627