تلطيخ ماسون جولدنر ثلاثي الألوان: تقنية لتصور الكولاجين في أقسام القلب للكشف عن تليف القلب والأوعية الدموية

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Valentin ، J. ، et al. القياس الكمي النسيجي لاحتشاء عضلة القلب المزمن في الفئران. J. Vis. Exp.(2016).

يوضح هذا الفيديو التلوين التفاضلي لألياف الكولاجين والنوى والسيتوبلازم في أنسجة القلب لتصور النمو الليفي المرتبط بأمراض القلب.

البروتوكول

فئة < p = "jove_title" >1. تلطيخ ماسون جولدنر ثلاثي

الألوان

1. اصنع أقساما من الأنسجة من كتل القلب المضمنة في البارافين باستخدام ميكروتوم يدوي (سمك: 5 ميكرومتر).
2. قم بتلطيخ شريحة واحدة من كل جزء من أجزاء القلب لكل فأر (3-4 أقسام عرضية لكل شريحة) باستخدام تلطيخ ماسون جولدنر ثلاثي الألوان.
   1. تذوب الشرائح على حرارة 60 درجة مئوية في الفرن. تحت غطاء الدخان ، قم بإزالة البارافينات في الإكسيلول مرتين لمدة 10 دقائق لكل منهما. أعد ترطيبها في 100٪ إيثانول ، 95٪ إيثانول ، 70٪ إيثانول ، وماء مقطر لمدة 3 دقائق لكل منهما.
   2. قم بإصلاحها في محلول Bouin بين عشية وضحاها. ثم اشطفها بماء الصنبور الجاري لمدة 10 - 15 دقيقة. شطفها بالماء المقطر. احتضنها في الهيماتوكسيلين من ماير لمدة 3 دقائق.
   3. قم بإزالة الشرائح واتركها في الماء المقطر لمدة 5 دقائق. ثم احتضنها في حمض Fuchsin-Ponceau لمدة 5 دقائق. اشطفها بحمض الخليك 1٪ لمدة 1 دقيقة.
   4. بعد ذلك ، احتضنها في حمض الفوسفوموليبديك Orange G لمدة 1 دقيقة. اشطفها بحمض الخليك بنسبة 1٪ لمدة دقيقة واحدة ، واحتضنها في صبغة خضراء فاتحة لمدة 10 دقائق ، واشطفها في حمض الخليك بنسبة 1٪ لمدة 1 دقيقة.
   5. قم بتجفيفها في 70٪ إيثانول (30 ثانية) ، و 95٪ إيثانول (30 ثانية) ، و 100٪ إيثانول (5 دقائق). ضع قطرة واحدة من وسط التثبيت الراتنجي على أقسام المناديل ، وقم بتغطيتها بأغطية ، واتركها تجف.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ماير هيماتوكسيلين MHS32-1L سيجما ألدريتش حمض فوشين CI 42685 F8129-50G سيجما ألدريتش Ponceau Xylidin CI 16150 P2395-25G سيجما ألدريتش Orange G CI 16230 O3756-100G سيجما ألدريتش أخضر فاتح CI 42095 L5382-25G سيجما ألدريتش زيلول 10315083 هانيويل الإيثانول المطلق 10303990 هانيويل المجهر المحاكي SM2800 نيكون فورمالدهيد 99340 رياكتولاب تضمين الكاسيت ك 113.1 كارل روث برنامج قياس الصور من Bersoft Bersoft.com البرامج المرخصة