تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. القياس الكمي لتليف الأنسجة
- ضع أنسجة القلب المثبتة ببارافورمالديهايد على جهاز تقطيع الأنسجة وقم بقص أقسام بسمك 2 مم. ضع أقسام المناديل في شريط التضمين. تجفيف الأنسجة من خلال سلسلة من حمامات الكحول المتدرجة (50٪ و 75٪ و 95٪ و 100٪ لمدة ساعة واحدة لكل منها).
- تسلل إلى الأنسجة بالزيلين لمدة 1 ساعة وأخيرا في الشمع لمدة 1 ساعة. ضع الأنسجة المخللة في شريط مدمج وقم بتضمينه بشمع البارافين. قم بتخزين الأنسجة المضمنة في كتل البارافين في درجة حرارة الغرفة حتى الميكروتومين.
- قم بتقطيع الأنسجة المضمنة إلى أقسام بسمك 4 ميكرومتر. ضع الأقسام في حمام مائي 45 درجة مئوية. اغمس شريحة زجاجية في الحمام المائي بزاوية واقترب تدريجيا من حواف قسم البارافين للسماح بالارتباط الجزئي بالشريحة.
- حرك الشريحة داخل وخارج الحمام لإزالة الجيوب الهوائية المحتملة أسفل قسم المناديل وتسهيل التثبيت بشكل أفضل. جفف الشرائح عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة وقم بتخزينها في درجة حرارة الغرفة للتلوين النسيجي.
- ضع الشريحة في خزان. قم بإزالة الشريحة بالزيلين لمدة 30 دقيقة وأعد ترطيبها في كحول مخفف بالتتابع (95٪ و 75٪ و 50٪ لمدة 3 دقائق لكل منهما) وأخيرا في الماء المقطر. استخدم محلول بيكروسيريوس الأحمر المناسب لتغطية أقسام الأنسجة بالكامل لمدة 1 ساعة. اشطف الشرائح في محلول حمض الأسيتيك بنسبة 0.5٪ لتغييرين ، ثم قم بشطفها مرتين بالكحول المطلق.
- جفف الشريحة بالهواء وقم بتركيب الشريحة في الراتنج الصناعي مع غطاء. تصوير الشريحة في مجال الضوء المرئي.
ملاحظه: تظهر المنطقة الحمراء في الصورة منطقة موجبة حمراء picrosirius تحت المجهر بتكبير 200X. احسب النسبة المئوية للمنطقة الموجبة الحمراء picrosirius على المساحة الإجمالية ، مما يشير إلى مدى التليف.
