تلطيخ الكالكوفلور الأبيض: طريقة بسيطة لتصور التألق الناجم عن الأشعة فوق البنفسجية لرواسب السليلوز في جدران الخلايا للأقسام الجذعية لنبات ثنائي الفلقة

الملخص

المصدر: Pradhan M. et al. تلطيخ كيميائي نسيجي لعناصر جدار الخلية الثانوية نبات الأرابيدوبسيس thaliana. J. Vis. Exp. (2014)

في هذا الفيديو ، نصف إجراء تلطيخ لتصور ترسب السليلوز داخل جدران خلايا نبات الأرابيدوبسيس الثاليانا ، وهو نبات ثنائي الفلقة ، باستخدام اللون الأبيض الكالكوفلوري ، والذي يرتبط على وجه التحديد بالجلوكان المرتبط β ، ويظهر التألق تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. تضمين الجذع

1. اصنع محلول الاغاروز بنسبة 7٪ في الماء (7 جم من الاغاروز بدرجة الرحلان الكهربائي في 100 مل من الماء المقطر). قم بإذابة الاغاروز عن طريق التعقيم لمدة 20 دقيقة أو عن طريق الميكروويف لمدة 20 دقيقة بأقل كثافة (على سبيل المثال ، كثافة 10٪ من ميكروويف 1،250 واط).
2. قم بإعداد قالب محلي الصنع لتضمين السيقان باستخدام قوارير بلاستيكية.
   1. باستخدام شفرة حلاقة ، قم بقطع الجزء السفلي المخروطي لأنبوب الطرد المركزي الدقيق ذو الغطاء اللولبي سعة 2 مل (الجزء أ). باستخدام إبرة حقنة ، قم بثقب ثقب في غطاء الأنبوب أكبر قليلا من قطر الجذع المراد تضمينه. بعد ذلك ، قم بقطع 0.5 سم من قاع أنبوب الطرد المركزي الدقيق 0.6 مل ....

النتائج

الشكل 1. قالب محلي الصنع لتضمين السيقان. على الجانب الأيسر الجزء العلوي من أنبوب الطرد المركزي الدقيق ذو الغطاء اللولبي سعة 2 مل (الجزء أ) والجزء السفلي من أنبوب الطرد المركزي الدقيق سعة 0.6 مل (الجزء ب). على الجانب الأيمن. البارافيلم الذي يحمل الجزأين. A و B لتشكيل القالب النهائي.

....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات أغاروز EMD MERC2125 رقم سجل المستخلصات الكيميائية: 9012-36-6 منير الفلورسنت 28 / صبغة بيضاء كالكوفلور سيغما F3543 4،4'-مكرر [[4- [مكرر (2-هيدروكسي إيثيل) أمينو] -6-أنيلينو-1،3،5-تريازين-2-يل] أمينو] ستيلبين -2،2'-حمض ثنائي سلفونيك [رقم سجل المستخلصات الكيميائية 4404-43-7] الاهتزاز لايكا Leica تهتز شفرة microtome VT1000S http://www.leicabiosystems.com/products/sectioning/vibrating-blade-microtomes/details/product/leica-vt1000-s/ موسى شركة شفاقة السلامة الأمريكية الصنف # 60-0139-0000 شفرة مزدوجة الحواف من الفولاذ المقاوم للصدأ (Personna Super) أنابيب الطرد المركزي الدقيقة ذات الغطاء اللولبي (2 مل) VWR 16466-044 أنابيب الطرد المركزي الدقيقة (0.6 مل) أكسيجن العلمية MCT-060-C ميت بيل آرت 380000000 قفاز حامي اليد الساخن SCIENCEWARE لاصق الأنسجة شركة تيد بيلا 10033 يحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية أو 20 درجة مئوية لمدة 3 أشهر أو أكثر المايكرويف باناسونيك NN-SD762S PELCO Pro CA 44 لاصق مناديل فوري نظارات مايكرو كشور ، مربع ، رقم 1 VWR هاتف: 48366-067 22 × 22 مم (7/8 × 7/8 بوصة) - زجاج الغطاء مقاوم للتآكل وسميك ومسطح بشكل موحد. السماكة رقم 1 من 0.13 إلى 0.17 مم. شرائح صغيرة بلوستد ، 1 مم VWR 48312-003 75 × 25 مم - 1 مم بارافيلم م تغليف Alcan BRNDPM998