$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. تحضير نظام الكروماتوغرافيا
- قم بإعداد نظام الكروماتوغرافيا عن طريق شطف العينة والخطوط العازلة بالتتابع لكل منها بالماء المعقم ، وهيدروكسيد الصوديوم 1 نيوتن ، والماء ، ومحلول الغسيل (20 ملي مولار من فوسفات الصوديوم يحتوي على 150 ملي كلوريد الصوديوم ، الرقم الهيدروجيني 7.0) بمعدل تدفق خطي يبلغ 50 مل / دقيقة.
- قم بإعداد عمود هيبارين 50 ميكرومتر (10 × 10 سم ، 7.9 مل من حجم العمود (CV)) عن طريق تشغيل المخزن المؤقت لتنظيف العمود بالتتابع (5 CV معقم 20 ملي مولار من فوسفات الصوديوم يحتوي على 2 M كلوريد الصوديوم ، الرقم الهيدروجيني 7.0) و 5 مخزن غسيل CV بمعدل تدفق خطي يبلغ 7 مل / دقيقة.
< p class = "jove_title" >2. تنقية ناقل الفيروس العصبي
- قم بإعداد نظام الكروماتوغرافيا على النحو التالي:
- استخدم منفذ مدخل تحميل العينة لتحميل المادة الطافية للفيروس العصيبي.
- استخدم منفذ مدخل المخزن المؤقت A1 لتحميل مخزن الغسيل. قم بإعداد زجاجة بها 500 مل على الأقل من محلول الغسيل وضع خط الغسيل العازل في الزجاجة.
- استخدم منفذ مدخل المخزن المؤقت A2 لتحميل مخزن الشطف (20 ملي فوسفات الصوديوم مع 1.5 مولار كلوريد الصوديوم ، درجة الحموضة 8.0). قم بإعداد زجاجة بها 500 مل على الأقل من محلول الشطف وضع خط الشطف العازل في الزجاجة.
- أدخل عدة أنابيب مخروطية سعة 50 مل في مجمع الكسر لجمع المادة الطافية التي تمر عبر الفيروس الباكلي ، ومخزن الغسيل ، والفيروس الباكيلو.
- قم بموازنة عمود الهيبارين بخمسة أحجام أعمدة سعة 7.9 مل (CVs) من مخزن الغسيل المؤقت (40 مل) بمعدل تدفق خطي يبلغ 7.0 مل / دقيقة.
- قم بتحميل 250 مل من المادة الطافية للفيروس العصبي على عمود الهيبارين باستخدام مضخة العينة (منفذ عينة المدخل) لنظام الكروماتوغرافيا بمعدل تدفق خطي يبلغ 2.0 مل / دقيقة.
- قم بتشغيل 10 CVs (80 مل) من مخزن الغسيل المؤقتة عبر عمود الهيبارين بمعدل تدفق خطي يبلغ 2.0 مل / دقيقة حتى يعود منحنى امتصاص الأشعة فوق البنفسجية (280 نانومتر) إلى خط الأساس ويصبح مستقرا.
- قم بإزالة جزيئات الفيروس العصبي من عمود الهيبارين سعة 7.9 مل مع 5 CVs (40 مل) من المخزن المؤقت للشطف بمعدل تدفق خطي يبلغ 4.0 مل / دقيقة.
- بعد الشطف، قم على الفور بتخفيف المادة الطافية للفيروس الباكولوبي المملوثة بمقدار 10 أضعاف باستخدام محلول فوسفات الصوديوم 20 ملي مولار في الماء لمنع تعطيل جزيئات الفيروس العصبي من الصدمة التناضحية أثناء الطرد المركزي اللاحق.