كروماتوغرافيا التقارب المستندة إلى DFE: تقنية لتنقية الأجسام المضادة أحادية النسيلة 2F5 من عينة خام باستخدام ظروف شطف قائمة على القوة الأيونية العالية

الملخص

المصدر: Knödler، M. et al.، Activated Agarose المتشابك من أجل التطور السريع لراتنجات كروماتوغرافيا التقارب - التقاط الأجسام المضادة كدراسة حالة. J. Vis. Exp. (2019).

يصف هذا الفيديو تقنية كروماتوغرافيا التقارب لتنقية الأجسام المضادة أحادية النسيلة 2F5 باستخدام روابط DsRed-2F5-Epitope أو DFE. الأجسام المضادة أحادية النسيلة 2F5 المنقاة هي أدوية أساسية في العلاج المناعي.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. اختبار تنقية mAbs من مستخلصات النباتات المصفاة

1. تحضير 100 مل من المستخلص النباتي المصفى الذي يحتوي على 2F55 أو المادة الطافية من نظام التعبير الخلوي المفضل ، والذي يحتوي أيضا على 2F5.
2. تحضير مخزن مؤقت للتوازن (20 ملي مولار فوسفات الصوديوم ، 500 ملي كلوريد الصوديوم ، الرقم الهيدروجيني 7.4) ، محلول شطف منخفض الأس الهيدروجيني (0.05 ميلار سترات ، 0.05 مولار كلوريد الصوديوم ، الرقم الهيدروجيني 4.0-3.25) ، ومحلول شطف عالي القوة الأيونية (1.0-4.0 مولار كلوريد المغنيسيوم ، 0.1 مولار هيبس ، درجة الحموضة 8.0)
3. اغسل نظام الكروماتوغرافيا بالمخازن المؤقتة. قم بتركيب عمود تقارب DFE (راجع نص البروتوكول الرئيسي) على نظام الكروماتوغ....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات دي إس ريد فراونهوف IME غير متاح القياسية هايتراب سيفاروز HP المنشط بتقنية NHS، 1 مل جنرال إلكتريك هيلث كير 17-0716-01 أعمدة الكروماتوغرافيا هيبس كارل روث جي إم بي إتش 9105.3 مكون المخزن المؤقت كلوريد المغنيسيوم كارل روث جي إم بي إتش ك ك 36.2 مكون المخزن المؤقت الرقم الهاتفي 3110 WTW 2أ110 مقياس الأس الهيدروجيني Sephadex G-25 غرامة ، ديكستران متقاطعة جنرال إلكتريك هيلث كير 17003301 راتنج الكروماتوغرافيا كلوريد الصوديوم كارل روث جي إم بي إتش P029.2 مكون المخزن المؤقت سترات الصوديوم كارل روث جي إم بي إتش HN13.2 مكون المخزن المؤقت