كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة عالية الأداء: تقنية للفصل الأولي والقياس الكمي للدهون من العدلات

الملخص

المصدر: Brogden، G.، et al. طرق لدراسة التغيرات الدهنية في العدلات والتكوين اللاحق لمصائد العدلات خارج الخلية. J. Vis. Exp. (2017).

يوضح هذا الفيديو تقنية للفصل الأولي وتحديد كمية الدهون من العدلات المشتقة من الدم المحيطي البشري. تساعد هذه التقنية في التقييم الأولي للتحليلات المستهدفة قبل متابعة HPLC.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة عالية الأداء (HPTLC) لنصف كمية كمية العديد من الدهون ، بما في ذلك الكوليسترول والفوسفوليبيدات والسفينجوميلين

1. قم بإعداد حلول التشغيل الأربعة التالية ومحاليل التلوين.
   1. الحل 1: اخلطي أسيتات الإيثيل (26.6٪) ، 1-بروبانول (26.6٪) ، الكلوروفورم (26.6٪) ، الميثانول (26.6٪) ، وكلوريد البوتاسيوم (9.6٪). تحضير KCl عن طريق إذابة 0.25 جم من KCl في 100 مل من الماء بجودة HPLC.
   2. الحل 2: اخلطي n-hexane (73٪) ، ثنائي إيثيل الأثير (23٪) ، وحمض الستريك (2٪).
   3. الحل 3: 100٪ n-hexane.
   4. تحضير محلول التلوين عن طريق خلط الماء المقطر (90 مل) مع 7.5 غرام من كبريتات النحاس ، ثم إضافة 10 مل من حمض الفوسفوريك.<....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 1-بروبانول سيجما ألدريتش 33538 حقنة 10 ميكرولتر هاملتون 701 NR 10 ميكرولتر ثنائي إيثيل الأثير سيجما ألدريتش 346136 أسيتات الإيثيل كارل روث 7336.2 النحاس (II) كبريتات البنتا هيدرات ميرك 1027805000 كلوروفورم كارل روث 7331.1 برنامج CP ATLAS لازارسوفتوير 2 ميثانول كارل روث 7342.1 ن-الهكسان كارل روث 7339.1 دولار حمض الفوسفوريك سيجما ألدريتش 30417 كلوريد البوتاسيوم ميرك 49,361,000 هلام السيليكا HPTLC 60 ميرك 105553