يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الرحلان الكهربائي للهلام القلوي أحادي الخلية: تقنية حساسة للتقدير الكمي لتلف الحمض النووي في الخلايا السرطانية الفردية بعد العلاج الكيميائي

2.1K مشاهدة

⸱

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

المصدر: Lu ، Y. ، et al. تقييم تلف الحمض النووي في المختبر باستخدام مقايسة المذنب J. Vis. Exp. (2017)

في هذا الفيديو ، نوضح مقايسة الرحلان الكهربائي القلوية أحادية الخلية لتحديد فواصل الحمض النووي أحادية ومزدوجة الخيط في الخلايا المعالجة بالدوكسوروبيسين. تؤدي الظروف القلوية إلى تعطيل الروابط الهيدروجينية بين أزواج قواعد الحمض النووي ، مما يؤدي إلى الفك الكامل وفصل خيوط الحمض النووي. يسمح ذلك بالهجرة التفاضلية لشظايا الحمض النووي غير التالفة والتالفة في هلام الاغاروز عند الرحلان الكهربائي ، مما يكشف عن بنية على شكل مذنب من الحمض النووي غير التالف المهاجر ببطء الذي يشكل رأس المذنب الدائري ، وترحيل شظايا الحمض النووي التالفة بسرعة التي تشكل ذيل المذنب الممدود.

البروتوكول

1. تحضير الكواشف

  1. 1x برنامج تلفزيوني
    1. قم بتخفيف 100 مل 10x PBS مع 900 مل dH2O واضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 باستخدام مقياس الأس الهيدروجيني. يحفظ في درجة حرارة الغرفة.
  2. محلول التحلل (LS)
    1. تحضير 2.5 م كلوريد الصوديوم ، و 100 ملي مولار ثنائي الصوديوم EDTA ، و 10 ملي مولار قاعدة تريس ، و 200 ملي مولار هيدروكسيد الصوديوم في 900 مل ديسيموتر2O ؛ عادة ما يستغرق الأمر حوالي 20 دقيقة للسماح للخليط بالذوبان تماما. اضبط الرقم الهيدروجيني على 10 باستخدام مقياس الأس الهيدروجيني. أضف 1٪ ساركوسينات لوريل الصوديوم و 1٪ تريتون X-100 واضبط الحجم النهائي ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 10x PBS (Ca ++ ، Mg ++ مجانا) تكنوفا P0196 كلوريد الصوديوم سيغما S5886 EDTA تكنوفا E0308 قاعدة Trizma سيغما [ت1503] هيدروكسيد الصوديوميوم سيغما 72068 ساركوسينات لوريل الصوديوم سيغما L7414 تريتون X-100 سيغما 93443 SYBR الأخضر إنفيتروجين S33102 انخفاض نقطة الانصهار الاغاروز إنفيتروجين 16520 [إ] أغاروز إنفيتروجين 16500 95٪ إيثانول وارنر جراهام # 64-17-5 التربسين جيبكو هاتف: 25300-054 شرائح المناديل الزجاجية علوم المجهر الإلكتروني 63422-11 كيمويبس كيمبرلي كلارك 1.5 مل أنابيب الطرد المركزي الدقيقة دينفيل أطراف الماصة حاد المايكرويف افانتي حمام مائي دقة غرفة الرحلان الكهربائي الأفقي تريفيجن كوميتاساي ES II مزود الطاقة بيو راد حاضنه مختبر كوينسي نموذج 12-140E مجهر الفلورسنت زييس إل إس إم 700 ماصة دقيقة إيبندورف

استكشف المزيد من المقالات

مقايسة المذنب القلويةتقدير كمية تلف الحمض النوويخلايا معالجة بالعلاج الكيميائيأغاروز منخفض الانصهارمنظم كهربائي قلويصبغة حمض نووي فلوريةمجهر فلوريتحليل ذيل المذنبتكسرات شريط الحمض النووي