Method Article

فحص امتصاص الحويصلة خارج الخلية: طريقة لتصور وقياس الامتصاص الخلوي للحويصلات خارج الخلية باستخدام تقنية التصوير الفلوري ثلاثي الأبعاد

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Kim، C. J.، et al.، مقايسة امتصاص الحويصلة خارج الخلية عن طريق تحليل التصوير المجهري متحد البؤر. J. Vis. إكسب. (2022).

في هذا الفيديو ، نوضح اختبارا لتصور وقياس الامتصاص الخلوي للحويصلات خارج الخلية أو EVs. يستخدم هذا الاختبار التصوير الفلوري ثلاثي الأبعاد باستخدام مجهر متحد البؤر ويسمح بالتمييز بين المركبات الكهربائية الداخلية وتلك الملتصقة بسطح الخلية.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
فئة

1. عزل EV ووضع العلامات على المركبات الكهربائية المناعية الفلورية على الرقاقة

  1. جمع وسائط زراعة الخلايا (CCM) والمعالجة المسبقة ل CCM لعزل EV
    1. بذور خلايا PC3 عند التقاء 30٪ في قارورة ثقافة خلية 75 سم2. اسمح لخلايا التحكم بالنمو إلى 90٪ من التقاء (~ 48 ساعة) في الوسائط القياسية والمكملات الخاصة بخط الخلية.
      ملاحظه: لمنع المكونات المحتوية على EV من التأثير على امتصاص الخلايا (أي مصل الأبقار الجنينية) ، استخدم الوسائط والمكملات الغذائية المستنفدة من الإكسوسوم.
    2. حصاد CCM.
    3. جهاز الطرد المركزي CCM عند 1000 × جم لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة (RT) لحبيبات أي خلايا غير متصلة وحطام كبير ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: رسم تخطيطي لعزل EV ووضع العلامات على الرقاقة باستخدام جهاز ميكروفلويديك قائم على الترشيح النانوي. (أ) عزل المركبات الكهربائية عن CCM. (ب) وضع العلامات على الفلورسنت المناعي على المركبات الكهربائية. (ج) إزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

< p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments Alexa Fluor 488 الأجسام المضادة CD63 المضادة للإنسان بيوليجند 353038 صبغة الفلورسنت مترافقة الجسم المضاد الخاص بالمركبات الكهربائية صبغة CellTracker البرتقالية CMTMR ثيرمو فيشر العلمي [ك2927] [ك] كاشف وضع العلامات على الفلورينت للخلايا الحية (السيتوبلازم) CFI Apo Lambda S 40XC WI نيكون MRD77400 الهدف للتصوير متحد البؤر ، NA = 1.25 خطة CFI Apo VC 20X نيكون MRD70200 الهدف من التصوير متحد البؤر ، NA = 0.75 Exodisc شركة لابسبينر السابق-D1001 جهاز ميكروفلويدي قائم على الترشيح النانوي لعزل المركبات الكهربائية إكسو ديسكفري شركة لابسبينر سابقة - R1001 جهاز تشغيل Exodisc FBS المستنفدة للجسيمات الخارجية ثيرمو فيشر العلمي A2720801 المغذيات لوسائط زراعة الخلايا لمجموعة EV المشتقة من خط خلايا PC3 مصل الأبقار الجنينية (FBS) VWR 1500-500 المغذيات لزراعة الخلايا الماعز المضادة للفأر IgG H&L الممتزة مسبقا أبكام أب7063 الجسم المضاد IgG للفأر للتحكم في وضع العلامات على المركبات الكهربائية طبق μ الولايات المتحدة الأمريكية 35 مم المرجع نفسه 81156 طبق مزرعة للتصوير متحد البؤر إماريس 9.7.1 أكسفورد إنسترومنتس 9.7.1 برنامج معالجة ما بعد الصور نظام الحاضنة + خلاط غاز CO2 / O2 / N2 أداة الخلية الحية TU-O-20 نظام حاضنة لتصوير الخلايا الحية كاميرا نيكون A1 HD25 / A1R HD25 نيكون غير أ كاميرا للتصوير متحد البؤر نيكون Eclipse Ti المجهر نيكون غير أ المجهر المقلوب للتصوير متحد البؤر NIS-عناصر AR 4.50.00 نيكون 4.50.00 برنامج معالجة الصور لمجهر نيكون NTA ، NanoSight NS500 مالفيرن التحليلي NS500 جهاز قياس تركيز EV أوريجينر برو 2020 مختبر أوريجين 9.7.0.185 برامج الرسوم البيانية البنسلين - ستربتومايسين ثيرمو فيشر العلمي 15140122 المضادات الحيوية لزراعة الخلايا RPMI 1640 ثيرمو فيشر العلمي 21875034 وسائط زراعة الخلايا لزراعة خط خلايا PC3 SYTO RNAاختيار صبغة الخلايا الفلورية الخضراء - محلول 5 ملي في DMSO ثيرمو فيشر العلمي الطراز S32703 صبغة الفلورسنت تلطيخ الحمض النووي الريبي لوضع العلامات على المركبات الكهربائية

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Extracellular Vesicle UptakeConfocal Microscopy Imaging3D Fluorescence ImagingEV Internalization AssayCell Surface AdhesionZ Stack Image AcquisitionVirtual Surface ReconstructionSpot Detection AnalysisCytoplasm Labeling TechniqueAutomated Image Processing

Related Articles