$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >1. مقايسة تغذية الدم للبالغين (جرعة واحدة أو مقايسة استجابة الجرعة)
- اجمع ما يقرب من 150 من أنثى البعوض البالغة التي تتراوح أعمارها بين 4 و 5 أيام وانقلها إلى قفص منفصل. كرر للحصول على 6 أقفاص في حالة إجراء فحص الاستجابة للجرعة. قم بإزالة مصدر السكر قبل 1-24 ساعة من فحص التغذية.
- قم بإعداد محلول مخزون من الكيمياء كما هو موضح أعلاه ، مع مراعاة نقاء الكيمياء (محلول المخزون النموذجي هو 80 ملي مولار في الماء أو المحلول المؤقت) ، ثم قم بإعداد التخفيفات التسلسلية في الماء / العازلة حسب الحاجة.
- أضف 40 ميكرولتر من كل من التخفيفات إلى 960 ميكرولتر من دم الأرانب منزوع الرجفان للحصول على تركيز الاختبار المطلوب. ضع غشاء غشاء على وحدة التغذية وأغلقه بحلقة مطاطية. انقل 1 مل من الدم عبر الماصة وقم بتوصيل وحدة التغذية بوحدة تسخين.
- امسح سطح الغشاء برفق بمحلول حمض اللاكتيك الطازج بنسبة 10٪ وضع وحدة التغذية في قفص البعوض البالغ. قم بتغطية القفص بقطعة قماش داكنة أو كيس قمامة أسود واترك البعوض يتغذى لمدة ساعة واحدة.
- كرر الخطوات 1.2 - 1.4 لبقية محاليل الاختبار والتحكم السلبي (الدم فقط).
- عند الانتهاء من الرضاعة ، ضع الدلاء على حرارة 4 درجات مئوية في الثلاجة لمدة 5 دقائق لتخدير البعوض. إزالة ذكور البعوض وإناث البعوض غير المغذى ، وإحصاء وتسجيل العدد الإجمالي للبعوض الذي يتغذى عليه ويتغذى جزئيا عن طريق فحص البطن.
- احتفظ بإناث البعوض التي تتغذى جزئيا وكليا، بهدف الحصول على ما لا يقل عن 50 بعوضة تتغذى بالدم لكل جرعة.
- انقل الدلاء إلى حوض بلاستيكي أو غرفة نمو في ظل ظروف ثابتة تبلغ 28 درجة مئوية و 75 - 85٪ رطوبة نسبية (يفضل في دورة 12 ساعة في النهار / 12 ساعة ليلية).
- سجل العدد الإجمالي للبعوض الميت / غير المستجيب عند 0.5 و 1 و 1.5 و 2 و 24 و 48 و 72 ساعة (أو نقاط زمنية بديلة حسب الرغبة) باستخدام ورقة النتائج (الجدول 1).
- في اليوم الثالث بعد الرضاعة بالدم ، أدخل كوب بيض في القفص واجمع البيض على مدى 72 ساعة. احسب العدد الإجمالي للبويضات المنتجة لكل معالجة تحت مجهر تشريح.
- احسب النسبة المئوية للوفيات والخصوبة كدالة للعدد الإجمالي للبعوض الذي يتم تغذيته لكل مجموعة معالجة ومجموعة التحكم. تصحيح معدل الوفيات المعدل باستخدام صيغة Abbott المعدلة إذا رغبت في ذلك.
- عرض بيانات السمية والخصوبة كمخطط رسم بياني أو منحنى أسي (في حالة إجراء فحص استجابة الجرعة) باستخدام برنامج من اختيارك. في حالة إجراء مقايسة استجابة الجرعة ، احسب قيمة LD50 أو LD75 أو LD90 لكيمياء الاختبار بالنسبة إلى عنصر التحكم.
- كرر الاختبار مرتين على الأقل باستخدام دفعات منفصلة من البعوض للحصول على n = 3 أو أكثر من التكرارات البيولوجية.
< p class = "jove_content" >
الجدول 1. مثال على ورقة الدرجات المستخدمة لتسجيل البيانات من مقايسة تغذية الدم للبالغين.الجرعات النموذجية المستخدمة لاختبار الكيمياء المضادة للجزيئات الصغيرة مثل أميتريبتيلين هي 50 ميكرومتر و 100 ميكرومتر و 200 ميكرومتر و 400 ميكرومتر.
البعوض البالغ (3-5 أيام) الفحص الموضعي
تاريخ البدء:
محقق:
الأنواع / السلالة:
نوع الفحص: جرعة واحدة / جرعة استجابة
A. الوفيات (عدد البعوض الميت)
الوقت (ساعات)
الجرعة 1
الجرعة 2
الجرعة 3
الجرعة 4
الجرعة 5
تحكم
0.5
1
1.5
2
2.5
B. النسبة المئوية للوفيات
الوقت (ساعات)
الجرعة 1
الجرعة 2
الجرعة 3
الجرعة 4
الجرعة 5
تحكم
0.5
1
1.5
2
2.5