تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تشمل مشاركين بشريين وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية والوطنية والدولية لرفاهية الإنسان وتمت مراجعتها من قبل مجلس المراجعة المؤسسية المحلية.
< p class = "jove_title" >1. فحص نشاط السموم الداخلية (EAA)
- جمع عينات دم المريض في أنابيب معقمة تحتوي على مضادات التخثر EDTA. تخزين عينات الدم في درجة حرارة الغرفة
- قم بإعداد أنابيب اختبار EA لعينة دم كل مريض تحتاج إلى اختبارها. ضع الأنابيب في رفوف الأنبوب. ثم قم بإزالة الأغطية.
- يتكون كل اختبار EA من 5 أنواع مختلفة من الأنابيب ؛ استخدم كل منها لجزء مختلف من الاختبار (راجع الخطوات التالية).
- استخدم الأنبوب # 1 (أنبوب "التحكم") لقياس النشاط القاعدي للانفجار التأكسدي غير المحدد للعدلات لدى المريض في حالة عدم وجود جسم مضاد محدد.
- استخدم الأنبوب # 2 (أنبوب "العينة") لقياس الانفجار التأكسدي استجابة لمركب عديدات السكاريد الدهنية (LPS) - الأجسام المضادة.
- استخدم الأنبوب # 3 (أنبوب "ماكس") لقياس أقصى انفجار مؤكسد لعدلات المريض استجابة لفائض السموم الداخلية.
- استخدم الأنبوب # 4 (أنبوب "LPS") كمصدر للسموم الداخلية الخارجية.
- استخدم الأنبوب # 5 (أنبوب "Aliquot") لتخزين الدم.
ملاحظة: يتم توفير نسخ مكررة من الأنابيب # 1 و # 2 و # 3 لإجمالي 8 أنابيب لاستخدامها لكل عينة دم يتم اختبارها (يمكن استخدام زجاجة كاشف EA واختبار مراقبة الجودة لجميع الاختبارات الموجودة في الحقيبة).
- باستخدام ماصة مركبة، قم بتحويل حجم 1 مل من كاشف EA من الزجاجة إلى الأنابيب #1 (أنبوب التحكم)، و#2 (أنبوب العينة)، و#3 (الأنبوب الأقصى)، كل واحدة في نسختين.
ملاحظة: الماصة أسفل جانب الأنبوب لتجنب تناثر المحلول احتياطيا.
- امزج عينة دم المريض عن طريق قلب أنبوب جمع الدم برفق 20 مرة. بعد ذلك، يتم إدخال ماصة 0.5 مل من دم المريض في الأنبوب #4 (أنبوب LPS max) والأنبوب #5 (أنبوب Aliquot). أنبوب دوامة # 4 لمدة 10 ثوان.
- ضع رفوف الأنبوب مع جميع أنابيب اختبار EA في شاكر الحاضنة. أغلق الغطاء واحتضنه لمدة 10 دقائق عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.
- افتح الغطاء وقم بإزالة رفوف الأنبوب من شاكر الحاضنة. أنبوب دوامة # 5 (أنبوب Aliquot). باستخدام طرف معقم، قم بإدخال 40 ميكرولتر من الدم في أنبوبين #1 و#2، في نسختين.
- أنبوب دوامة # 4 (أنبوب LPS). باستخدام نفس طرف الماصة، قم بإدخال 40 ميكرولتر من الدم من الأنبوب #4 إلى الأنبوب #3 (الأنبوب الأقصى)، في نسختين.
- دوامة أنابيب الاختبار الستة النهائية (# 1 ، # 2 ، # 3 ، والنسخ المكررة ذات الصلة) ، ثم ضعها مرة أخرى في رفوفهم.
ملاحظة: تأكد من أن جميع الأنابيب دوامة لنفس الفترة الزمنية.
- ضع رفوف الأنبوب مرة أخرى في شاكر الحضانة وأغلق الغطاء. اضبط شاكر الحضانة على 100 دورة في الدقيقة ، ثم ابدأ الحركة لمدة 14 دقيقة.
- أدخل بطاقة الشريحة التي تحمل علامة EA في مقياس اللومعان الكيميائي واضغط على ابدأ. بعد الحضانة لمدة 14 دقيقة ، اتبع التعليمات المعروضة على مقياس الكيميماتيوم لقراءة أنابيب EA بالترتيب الصحيح.
- قم بدوامة كل أنبوب برفق لمدة 10 ثوان قبل وضعه على حامل عينة مقياس الكيمياء. افتح درج العينة وضع الأنبوب # 1 في حامل العينة. ثم أغلق درج العينة وانتظر قراءة وحدة الضوء النسبي (RLU).
- كرر الخطوة 1.12 للأنبوب 2 والأنبوب 3.
- كرر الخطوة 1.12 للأنابيب المكررة 1 و 2 و 3.
ملاحظه: حاول دوامة جميع الأنابيب لنفس القدر من الوقت خلال الخطوات من 1.12 إلى 1.14.
- بعد معالجة جميع الأنابيب ، لاحظ أنه سيتم حساب نتائج EA وطباعتها تلقائيا. يتم التعبير عن المستويات كوحدات EA وتمثل متوسط التحديدات المكررة من نفس العينات.
- كرر الخطوات من 1.4 إلى 1.15 لكل عينة دم تحتاج إلى اختبار.
- بمجرد اكتمال الفحص ، قم بتخزين أنابيب الاختبار المتبقية وكواشف EA عند 2-8 درجات مئوية لمدة تصل إلى 30 يوما.