Method Article

مقايسة إطلاق إنزيم الوسيط المتوافق مع البشر: طريقة كيميائية مناعية لفحص إمكانات الحساسية لمستضد الاختبار عن طريق مراقبة استجابة التحلل القاعدي في المختبر

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Wenger ، M. et al. اختبار إصدار الوسيط المتوافق مع البشر كقراءة لفاعلية مسببات الحساسية. J. Vis. Exp. (2021)

في هذا الفيديو ، نصف طريقة في المختبر لتقييم إمكانات الحساسية للمستضد للحث على تحلل القاعدي. يستخدم β-hexosaminidase كمؤشر لإطلاق الوسيط الكيميائي ، ويتم قياس نشاط إنزيم β-hexosaminidase باستخدام ركيزة فلورية.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تشمل المشاركين البشريين وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية والوطنية والدولية لرفاهية الإنسان وتمت مراجعتها من قبل مجلس المراجعة المؤسسي المحلي

1. التحسس السلبي لخلايا huRBL

  1. جهاز طرد مركزي Ag8 / معلق مصل محتضن مسبقا لمدة 5 دقائق عند 250 × جم.
  2. انقل 50 ميكرولتر من معلق Ag8 / المصل بالطرد المركزي إلى كل بئر يحتوي على خلايا huRBL دون إزعاج حبيبات خلية Ag8.
    1. قم بتضمين عدم التحكم في المستضد ، وهي حساسة ، ولكن الخلايا غير المحفزة (لا تضيف المستضد) ، والتي تعمل كمؤشر على هضبة / خلفية الإشارة السفلية. لا تحتاج آبار التحكم في التحلل في الخلفية والحد الأقصى إلى الحساسية بالمصل. أض....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments 4-ميثيل أومبيليفيريل ن-أسيتيل-β-د-جلوكوزامينيد سيغما م 2133 لوحة 96 بئر لخلايا huRBL (Nunc MicroWell 96-Well ، Nunclon Deltatreat ، صفيحة مسطحة القاع) ثيرموفيشر العلمي 167008 صفيحة 96 بئر لمحلول الركيزة والمواد الطاففية للخلية (Greiner BioOne غير المعالجة 96 بئر من الألواح الدقيقة) فيشر ساينتيك 655101 ألبومين مصل الأبقار (BSA) سيغما 10735078001 حامض الستريك أبليشم 131018 جلايسين أبليشم أ 3707 كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم) أبليشم أ 2942 كربونات هيدروجين الصوديوم (NaHCO3) أبليشم 131638 تريتون X-100 سيغما X100 ملح تيرود سيغما تي 2145

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Basophil DegranulationMediator Release AssayBeta Hexosaminidase ActivityHuman IgE Fc ReceptorsAllergen Potency ScreeningFluorogenic Substrate HydrolysisTyrode s Buffer WashingTriton X 100 LysisMicroplate Reader FluorescenceIn Vitro Allergy Testing

Related Articles